Для фотошопа решетка: Использование сеток и направляющих в Photoshop

Кисть для фотошопа — Сетка / Creativo.one

Доступ
к PREMIUM-контенту

93 видеоурока только
для PREMIUM-пользователей. Коллекция пополняется несколько раз в месяц!

Обратная связь
от PRO

При добавлении работы на портал вы сможете получить обратную связь от нашего эксперта — Елены Минаковой.

Доступ к закрытым
трансляциям

Для участников PREMIUM регулярно проводятся закрытые трансляции с профессионалами. Остальным они доступны только за деньги.

Отсутствие
рекламы

PREMIUM-пользователи не видят рекламных объявлений и баннеров.

Приоритетная
проверка работ

Все работы, которые вы добавляете в портфолио, рассматриваются в приоритетном порядке.

Статистика
переходов в соцсети

Вы будете видеть, сколько человек перешли по ссылкам соцсетей из вашего профиля.

Возможность
скачивать видеоуроки

Вы сможете скачивать видеоуроки без ограничений.

PREMIUM-статус
на аватаре

На вашей аватарке будет отображаться значок, обозначающий Premium-статус.

Короткая именная
ссылка на профиль

Получите именную ссылку на профиль вида https://creativo.one/sasha

Возможность отложенной
публикации постов

Вы сами решаете, в какое время пост появится в ленте.

Светлая / темная
тема сайта

Меняйте тему оформления сайта под свое настроение.

Расширенные возможности опросов

Возможность устраивать голосование с прогрессивным рейтингом. Возможность создавать викторины (скоро).

%d1%81%d0%b5%d1%82%d0%ba%d0%b0 PNG, векторы, PSD и пнг для бесплатной загрузки

⭐ Тюремная решетка для фотошопа — Рейтинг сайтов по тематике на RANKW.RU

Как убрать в фотошопе пиксельную сетку

Как убрать сетку в Фотошопе?

Винни, у меня все фото в клетку! На всех открытых фотографиях сетка. Что делать?

В Фотошопе?

Да.

Ничего страшного, Пятачок, сейчас уберем.

Быстро убрать или добавить сетку на фото в Photoshop можно с помощью сочетания клавиш (Ctrl+H).

Или зайти в Просмотр / Вспомогательные элементы / Показать /Сетку. Убери галочку у Сетки.

Ну ка? Помогло?

Помогло, Винни, но при загрузке следующей партии фото у них все равно появляется сетка. Все фото в клеточку! Что за напасть?

Пятачок, не волнуйся. Есть радикально решение.

Какое?

Удерживай при запуске Фотошопа одновременно клавиши Shift+Ctrl+Alt.

Появится окошко с вопросом: «Удалить файл настройки Adobe Photoshop?»

Жми на «Да».

Только учти, у тебя пропадут твои настройки Фотошопа — размер фото может быть теперь не в пикселях, а в пунктах; исчезнет рабочая среда, если ты ее создавал под себя, пропадут также назначенные тобой горячие клавиши.

Но все это быстро можно настроить. Тем более, что у тебя как у начинающего юзера практически нет собственных настроек.

Запись опубликована в рубрике Photoshop, оформление с метками Photoshop. Добавьте в закладки постоянную ссылку.

Как включить и выключить сетку в фотошопе

Привет всем посетителям сайта Pixelbox.ru

В программе фотошоп присутствует прекрасный инструмент, помогающий с точностью до пикселя расположить объекты, нарисовать объекты заданного размера и т.п. Называется этот инструмент Сетка. Зачастую его используют веб дизайнеры, но этот инструмент настолько полезен, что о нем должен знать каждый. Если до сих пор вы не знали, что такое Сетка в фотошопе, как ее включить и как пользоваться – вам этот урок будет весьма кстати. 

Стоит отметить, что Сетку не видно при сохранении изображения в форматах jpg, png, gif. Так же Сетка «невидима» при печати. Сетка видна только в самой программе фотошоп или если сохранить изображение в формате PSD или TIFF. Если сохранить изображение в формате PSD или TIFF и передать файл другому человеку, он, открыв файл на своем компьютере, сможет увидеть созданную вами Сетку. 

Как включить/выключить Сетку (Grid)

Для начала, как всегда, создаем новый документ в фотошоп (Ctrl + N) с произвольным размером, у меня это 800х600 пикселей:
По умолчанию вкладка с новым документом будет выглядеть так: Для того, чтобы включить Сетку, нужно перейти в меню Просмотр — Показать — Сетку (View — Show — Grid) либо же нажать сочетание клавиш Ctrl + “ («Э» в русской раскладке клавиатуры): К слову, для того, чтобы выключить Сетку, необходимо проделать те же действия – перейти в меню Просмотр и снять галочку у «Сетки» или же повторно зажать Ctrl + “.

Как настроить Сетку

По умолчанию, Сетка разделена жирными линиями, расстояние между которыми 2 см, в свою очередь эти блоки разделены пунктирными линиями еще на 4 части. Изменить эти настройки под свои нужды возможно, перейдя в меню Редактирование — Установки — Направляющие, сетка и фрагменты (Edit — Preferences — Guides, Grid & Slices) либо же нажав сочетание клавиш Ctrl+K и Ctrl+8. 
Откроется следующее окно, в котором можно изменить настройки цвета, единицы измерения Сетки и т.п.

Предположим, нам нужно вырезать прямоугольник на слое, чтобы сделать рамку, оставив по краям 50 пикселей. 

Изменим сантиметры на пиксели и выставим шаг в 50 пикселей: Активируем инструмент Прямоугольное выделение (Rectangular marquee), горячая клавиша вызова инструмента – M. Небольшой совет по использованию сетки в фотошопе: При работе с Сеткой, а также с Направляющими и слоями, желательно включить функцию Привязка.  Когда эта функция активна, создаваемые объекты как бы «прилипают» к линиям Сетки (в нашем случае). Чтобы убедиться, что функция включена, перейдите в меню Просмотр — Показать (View — Show). Если галочка у «Привязка» не включена, щелкните по этому пункту, чтобы ее поставить. 
Далее перейдите на пункт ниже, «Привязать к…», настройки должны иметь следующий вид: Если же они имеют иной вид, активируйте нужный пункт щелчком по нему либо же нажмите на пункт «Все», во втором случае привязка включится сразу по всем имеющимся пунктам: Создаем выделение при помощи инструмента Прямоугольное выделение, отступая на 50 пикселей от краев изображения. Стороны создаваемого прямоугольника «прилипают» к линиям Сетки и не позволяют нам залезть за границы: Переходим на панель слоев и щелкаем по «замочку»: Нажимаем на клавиатуре клавишу Delete: Снимаем выделение (Ctrl + D), отключаем Сетки (Ctrl + “). Рамочка готова! Создайте новый слой CTR+N, который будет находится под белым обрезанным фоном. Вставьте туда фото Файл — Поместить Это всего лишь один пример использования Сетки, надеюсь, полученные в уроке знания помогут вам упростить и облегчить работу в фотошоп. Многим разметка помогает создавать ровные чертежи в фотошопе или таблицы. Найдите и своё применение сетки в фотошопе.

Как убрать сетку в фотошопе — photoshop как отключить сетку при большом увеличении изображений — 22 ответа



В разделе Программное обеспечение на вопрос photoshop как отключить сетку при большом увеличении изображений заданный автором Ёторожев Сергей лучший ответ это Ctrl+H или View>>>Extras.Екатерина КомильфоУченик(98)

упс… Это не то! Когда включаю перо, она опять появляется! -_-

Ответ от Особенный[гуру]Так-таки и не было! Если увеличить изображение до такого предела, когда оно разобъется на отдельные пикселы, то так оно все и было. Пользовался еще Фотошопом 7.0, и хотя до пикселизации весьма нечасто приходилось увеличивать, но я помню точно, что квадратики-пикселы всегда были.Ответ от Европеоидный[гуру]это разрешение картинки низкоеОтвет от Прославленный[новичек]В русском фотошопе Просмотр->Показать->Пиксельная сетка

Как убрать пиксели в фотошопе на русском при увеличении объекта

Возможности графического редактора Photoshop обширны. Люди используют его в самых разных целях во многих сферах. Если вы свяжете свою деятельность с этой программой, то когда-нибудь столкнётесь с необходимостью увеличить размеры изображения, что приведёт к появлению пикселей (потери качества).

Но, как я уже сказал выше, возможности обширны, поэтому можно исправить такой изъян. С вами Андрей Зенков и сегодня я расскажу, как убрать пиксели в фотошопе.

Что можно сделать с неаккуратно оборванным листом? Взять ножницы и обрезать неровности, чтобы получился плавный край. Суть методов, о которых я сегодня расскажу, заключается в сглаживание пикселей на контурах изображения. Для тренировки я возьму простенькую картину, которая потеряла качество при увеличении.

Кстати, недавно я рассказывал, как сделать Фотошоп на русском. Посмотрите эту статью, чтобы легко справиться с моим сегодняшним уроком (если у вас английская версия), так как я использую русскоязычный интерфейс. Сделать это можно за несколько минут.

Выделение и уточнение краёв

Для начала откройте в фотошопе картинку волшебника, на которой мы будем тренироваться. Для этого в верхнем меню выберите «Файл — Открыть…».

Самое сложное в данном методе — работа с выделением, если вы с ним прежде не сталкивались. Но не пугайтесь так сразу, сложное в рамках этого простого способа. Нам понадобится инструмент «Быстрое выделение». Чтобы найти его, нажмите на клавиатуре W. В левой навигации выделится «волшебная палочка». Нажмите на неё правой кнопкой мыши и выберите искомый нами предмет.

Прежде чем начать, необходимо настроить размер выделения. Делается это аналогичным образом с простой кисточкой. Для размеров нашего изображения хватит 25 px.

Сейчас вам необходимо «обвести» старика. Чтобы начать процесс, кликните левой кнопкой мыши в любом месте его туловища. Появится первая выделенная область. Чтобы расширить её, нажмите ещё раз, но уже в другом месте. Площадь выделения будет увеличиваться. Ваша конечная цель — полностью обвести Мерлина, то есть по его контуру должны появиться так называемые «бегающие муравьи»:

Совет: если осталась маленькая область, для которой размер инструмента слишком большой, можете уменьшить количество px, как мы это делали выше при настройке габаритов выделения. Если участок меньше кисточки, высока вероятность «зацепить» не те элементы.

Мы переходим к основной сути данного способа. Теперь нам необходимо уточнить края. В верхнем меню нажмите на кнопку:

Если её там нет по каким-то причинам, в выделенную область кликните правой кнопкой мыши и выберите аналогичный вариант:

Перед вами откроется окно с какими-то непонятными настройками. Не будем подробно вдаваться в их суть, нас интересует лишь указание некоторых значений. Я подобрал оптимальный вариант, который подойдёт для моего изображения. С другими картинками, конечно, потребуются эксперименты. Передвижением ползунков вы достигнете оптимальных результатов. Для Мерлина подойдут такие конфигурации:

На фото сразу видны изменения. Контур его туловища сгладился, стал плавным. У меня получился такой результат:

Сглаживание краёв «пальцем»

Перед тем, как приступить к изучению этого метода, сделаем с вами копию всех видимых слоёв. Для этого нужно нажать сочетание клавиш CTRL + SHIFT + ALT + E. Будем работать с созданным слоем.

Что же мы имеем? При приближении картинки ухудшилось качество не только внешних границ, но и внутренних объектов. Их можно сгладить, используя инструмент «Палец». Чтобы активировать его, найдите в левом меню иконку капли и нажмите на неё правой кнопкой мыши. В открывшемся окошке выберите искомую функцию.

Настройки оставьте первоначальным. Суть работы проста. Чтобы убрать пиксели, например, со звезды на плаще, необходимо провести пальцем по её контуру, пока не будут сглажены большие квадраты. Границы звезды должна поменяться так:

Для тренировки можете обработать сразу несколько элементов. Я поработал со звездой, месяцем и частью бороды. Конечно, идеально чётким результат не назовёшь, но стало гораздо лучше:

Работать с пальцем нужно очень аккуратно. Доводите контуры до гладкого состояния, полностью убирайте «большие» пиксели. Чтобы у вас был ориентир, можете сверяться с фотографией звезды, которую я добавил выше.

Использование пера

Перо — ещё один простой инструмент, с помощью которого можно устранять с фотографии погрешности, появляющиеся при увеличении. Для работы нам понадобится исходное изображение Мерлина. Под ним создайте пустой слой (CTRL + SHIFT + N либо «Слои — Новый — Слой»). Залейте его белым цветом (ALT + BACKPSACE). «Перо» можете найти в левой навигации или активировать горячей клавишей P.

Как работать? Очень просто. С помощью этого инструмента мы будем рисовать область, которую нужно будет вырезать. Чтобы убрать пиксели и сглазить контур, нужно заступать за границы туловища. На словах, скорее всего, не совсем понятно, поэтому просто посмотрите наглядный пример:

Теперь, чтобы пиксели исчезли, нужно выделенную область вырезать. В любом месте нарисованной фигуры нажмите правой кнопкой мыши и в открывшемся меню выберите «Образовать выделенную область». После этого откроется окошко с настройками. Ничего не меняя, нажмите «Ок».

Мы получим уже знакомое нам по первому способу выделение с «бегающими муравьями». Чтобы получить требуемый результат, просто нажмите на BACKSPACE. Я обработал сразу всю картинку. Можете попробовать обработать всего Мерлина и сравнивать с моим результатом:

Как и в случае с пальцем, работать с пером необходимо тонко и аккуратно. С помощью него можно сглаживать острые углы и убирать пиксели. А вообще, применяют инструмент во многих работах для достижения различных целей, но об этом как-нибудь поговорим в других статьях.

Во время выполнения вы могли заметить, что при сильном увеличении появляется белая сетка. Иногда она сильно мешает при выделении тех или иных объектов. Её можно включать и отключать. Сделать это можно следующим образом: «Просмотр — Показать — Пиксельная сетка». Если напротив названия стоит галочка, значит, она активирована.

У текста тоже могут возникнуть проблемы с качеством при приближении. Маленький шрифт сделать чётким не получится, но для крупных надписей применимы способы, которые я описал выше. Используя первый метод, выделяйте сначала одну букву, уточняйте края и только затем переходите к следующей.

Я вам рассказал о трёх хороших способах, с помощью которых вы без проблем устраните пиксели с увеличенных фотографий. Для первых проб можете взять ту же картинку, которой пользовался я. Но чтобы закрепить весь материал, после возьмите другое изображение и проделайте аналогичные шаги.

Если вы хотите быстро поднять свой навык использования Adobe Photoshop CC или любой другой версии, рекомендую пройти курс Евгения Попова — «Photoshop для фотографа». Здесь есть много материала, в котором описываются интересные методы обработки фотографий.

Моё сегодняшнее время подходит к концу. Надеюсь, вам понравилась моя статья, и вы научились чему-то новому. Подпишитесь на мой блог, чтобы самым первым узнавать о новых публикациях на сайте.

С вами был Андрей Зенков, скоро увидимся, всем пока.

Создаем дизайн веб-страницы с помощью 960 Grid

В этом уроке мы разработаем дизайн веб-страницы, используя 960 Grid System. Вы увидите, как работая с этой системой можно рационализировать процесс веб-разработки и как пользоваться системой сетки:

Начнем с создания нового документа в Photoshop, шириной 1680 px и высотой 1100 px. Фон заливаем светло-серым цветом (# F9F9F9).

В сети доступно множество систем для создания сеток, а также примеров по созданию своих собственных систем. Цель данного руководства состоит в том, чтобы облегчить создание системы на первоначальных этапах.

Все это поможет провести рабочий процесс на одном дыхании, и прекрасно подходит для создания прототипов ваших макетов.

Для начала скачайте 960 grid system. После этого распакуйте 960 Grid System Натана

Смита в папку с шаблонами. Открываем 12 столбцовый макет 960 grid в Adobe Photoshop:

Теперь нам нужно создать базовую сетку. Базовая сетка поможет с промежутками между элементами и высотой линий. Создадим новый документ 24 на 24 пикселя, удалим фон, нарисуем линию, толщиной 1 px в нижней части документа.

Мы определим этот документ как шаблон: Edit > Define Pattern и присвоим ему запоминающееся название:

Далее возвращаетесь к нашему документу и создаете новый слой. Заполняете этот слой шаблоном, Edit> Fill. Так мы создадим базовую сетку:

И наконец, мы выделим нашу рабочую область, используя направляющие. Создаем новую направляющую View > New Guide, выбираем вертикальный тип и создаем направляющие в точках 360px, 840px и 1320px.

Мы выбрали именно эти точки, потому как при ширине рабочей области в 960px, между точками 360px и 1320px — центральная 840px.

Если вы работаете напрямую из файла 960 Template, направляющие уже созданы, и их необходимо только отобразить через меню View > Show > Guides:

Вы можете сохранить этот документ в качестве шаблона и использовать по мере необходимости. Это сэкономит вам кучу времени.

Высоту холста всегда можно изменить под свои нужды. И опять же, со временем вы, вероятно, отдадите предпочтение полноценной системе с дополнительными направляющими.

Теперь, когда у нас настроен шаблон, мы можем приступить непосредственно к дизайну.

Мы разделим страницу на пять секций:

1. Header;
2. Callout;
3. Content – Left;
4. Content – Right;
5. Footer.

Мы начнем с верха страницы и будем двигаться к низу, потому заголовок будет первым элементом, с которым мы работаем.

С помощью Rectangular Marquee Tool выбираем область шириной во весь документ и высотой в 120px — вам могут помочь направляющие или же тяните за край прямоугольного выделения до тех пор, пока не заполните пять горизонтальных маркеров, затем заливайте выделенную область серым цветом (#2C2C2C).

Эта область будет использоваться под лого и панель меню:

Далее вставляем лого в левый верхний угол, равняем его по второму столбцу сетки, оставляя отступ в 40px. Для этого проекта я использовал лого, основанное на шрифте 50 pt Century Gothic.

Первое слово — залито светло-голубым (#ADC7D9), второе выделено жирным и залито белым (#FFFFFF). Далее применяем внутреннюю тень к элементам лого.

Я уменьшил внутреннюю непрозрачность до 25%, поставил значения Distance равное 2px , Choke равное 0% и Size — 5px:

Меню. Чтобы сохранить простой и строгий вид, мы будем использовать текст в основе меню. Выбираем для меню шрифт 18pt Arial.

Цвет активной ссылки, которая, в нашем случае, Home, имеет белый цвет (#FFFFFF), а остальные заполняем серым (#BBBBBB). Совмещаем эти элементы и помещаем их в центре верхней части заголовка:

Я назвал эту секцию Выкладка потому как на самом деле это именно то, что она делает — выкладывает информацию о странице.

Повторим действия на примере тех, что выполнили, создавая заголовок. С помощью инструмента Rectangular Marquee, выбирая высоту, равную 240px и заполняя голубым цветом (#ADC7D9), как и лого, делаем прямоугольник.

Мы добавим градиент в этой секции. Двойной клик для вызова Layer Style Panel и выбор Gradient Overlay. Тип окрашивания выставляем равным transparent overlay и меняем blend mode на overlay, уменьшаем opacity до 30%:

Так как мы назвали компанию «blue grid», добавим фон для секции Callout в стиле решетки. Для этого будем использовать технологию, схожую с той, которой пользовались, добавляя горизонтальные линии.

Для начала создаем документ размерами 25px на 25px. Снова удаляем фон, делая документ прозрачным, и рисуем одиночную линию шириной в 1px вдоль нижней части и еще одну в верхней части.

Завершаем этот шаг, присваивая этому документу вид шаблона путем Edit > Define Pattern:

Создайте новый слой поверх слоя Callout и заполните его созданным на шаге 8 паттерном с помощью меню Edit > Fill:

Поверните этот слой на 15 градусов, примените к нему наложение белого цвета и поместите его над секцией callout. Затем создайте новый слой и объедините его с белым решетчатым слоем. Дайте ему имя:

Примените режим наложения Soft Light к этому слою. Выберите область callout также с помощью инструмента Rectangular Marquee Tool или клавишей CTRL + клик мышкой на слое.

Затем выберите Rectangular Marquee Tool правым кликом мыши (CTRL + клик мышкой) и выберите select inverse и затем Delete. Эти действия уберут всю сетку, которая не находится в области блока callout:

Следующее, что мы должны сделать — убедиться в том, что решетчатый участок распространяется только на область рабочей зоны шириной в 960px. Используйте View > Show > Guides, затем добавьте маску слоя к решетчатому слою:

Выберите маску слоя, щелкнув по ней, затем, используя инструмент Gradient Tool (G), выберите градиент от черного к прозрачному.

Мы собираемся использовать данный способ для того, чтобы уничтожить сетку, которая располагается за переделами области в 960px.

Убедитесь, что тип градиента — Linear, и он установлен от черного к прозрачному. Начинайте от края и перетаскивайте градиент к началу решетки.

Повторяйте это до тех пор, пока не будете удовлетворены результатом. Заметьте, что маска слоя показывает черный градиент вокруг наружных граней:

Область callout необходимо наполнить контентом, который будет выполнен шрифтом Arial 45pt (#2C2C2C) и выделить необходимые слова жирным.

Под этим местом сделаем небольшое вводное предложение шрифтом 17pt и поместим его в левой части области:

Берите в руки Rectangular Marquee Tool и растягивайте прямоугольник между крайними правыми и средними направляющими, ставьте высоту в 8 линий, оставляя 1 линию вверху и 1 линию внизу, и заливайте темно-серым цветом (#2C2C2C).

Это фон к слайдшоу:

Добавьте тень к фону, дважды кликнув на панели Layer style и выбрав drop shadow, изменив цвет на # (2C2C2C) и выбрав Distance равный 1px и size, равный 10px:

Далее вам понадобится некий фиктивный контент для размещения в слайд-шоу. Я использовал скриншот моего блога. Размер меняем под размер области слайд-шоу с помощью меню Select> Modify> Contract 10px, выбрав инверсию, как ранее, далее delete:

Для начала добавим легкий градиент в этой секции. Сначала используйте Rectangular Marquee Tool, чтобы выбрать область для размещения контента, затем — Gradient Tool (G).

Выберите градиент от цвета (# f0f0f0) к прозрачности и перетащите его вниз. Не заходите слишком далеко. Фон у границы нижней части страницы должен вернуться к цвету (# F9F9F9):

Добавьте параграф описания шрифтом Arial 18pt #9C9C9C и со стилем ссылки Underlined #A3BBCC:

Для начала добавьте заголовок шрифтом Arial 25pt Bold #262626, затем добавьте элементы списка шрифтом Arial, цветом # 9C9C9C и величиной в 18 пунктов.

Пункт маркированного списка можно иллюстрировать с помощью Elliptical Marquee Tool или же использовать комбинацию клавиш Alt +7.

Выкрасите все пункты списка в светло-голубой цвет (# A4BCCD) и выровняйте по сетке:

Повторяйте этот шаг для добавления данных:

Наш последний раздел — подвал. Он будет содержать форму для авторизации, контактные данные и несколько ссылок. Начните с выбора нижней секции инструментом Rectangular Marquee Tool и залейте её темно-серым цветом (# 262626):

Добавим форму. Создайте заголовок шрифтом Arial 20pt Bold (#FFFFFF) и поместите в левую часть подвала. Затем с помощью инструмента Rectangular Marquee Tool нарисуйте два прямоугольника, которые будут полями для ввода данных.

Добавьте описания этим полям шрифтом Arial 16pt #9C9C9C:

Добавьте кнопку подтверждения ввода подобным же образом, но используя инструмент Rounded Rectangle Tool(U), затем добавьте Inner shadow к созданным элементам, установите значения параметра opacity в 30%, а size и spread в «0» и distance в 10px.

Добавьте ссылку «восстановить пароль» шрифтом Arial 13pt Underline #A4BDCD:

И наконец. Давайте закончим наш дизайн, добавив информацию о наших контактах. Заголовок исполните шрифтом Arial 20pt Bold (#FFFFFF) и подчеркните его, и ниже добавьте сами контакты шрифтом Arial 16pt #FFFFFF:

Используя сетку и направляющие, проверьте, что все выровнено и сбалансировано. Если нет — подстройте:

Надеюсь, вы получили понимание того, как можно работать с системой сеток, а также как настроить базовую систему самостоятельно.

Я настоятельно рекомендую вам экспериментировать с этими системами до тех пор, пока работа с ними не станет вашей второй натурой. Со временем, система сеток значительно облегчит вам вашу работу в качестве дизайнера!

Скачать PSD-файл

Данная публикация является переводом статьи «Design a Clean Web Layout with the 960 Grid» , подготовленная редакцией проекта.

Как создать направляющие в фотошопе? Что такое сетка?

Vell:

Очень интересно было бы узнать Ваш принцип работы с направляющими. Имею в виду, какие направляющие Вы оставляете в финальной версии psd-файла, показываете ли направляющими вертикальные отступы от блока до внутреннего текста (например, как Вы показали здесь), задаете ли 12 колонок сетки направляющими или демонстрируете только ту структуру колонок, которая реально используется?

Сетку я чаще всего использую 12-колонку и показываю ее направляющими:

Кроме этой сетки я не показываю никакие другие направляющие. Если элемент нужно разместить не по сетке (например, в футере зачастую своя сетка) — я так и делаю и никакие новые направляющие не добавляю. Вертикально все выравниваю через привязку и отсчитываю шифтом + стрелками расстояния. Горизонтальными направляющими я показал в гифке лишь для информативности в заметке). Если показывать все направляющие и горизонтальные и вертикальные и не только основную сетку, но и дополнительные, то потеряется весь смысл направляющих, так как не будет видна основная сетка. Да и в целом будет каша из линий, и что-то разобрать будет затруднительно.

Сколько не смотрела видео или не находила советов — все делают абсолютно по-разному. Многие оставляют сетку из 12 колонок (или задают ее отдельным слоем), к примеру, такую как 960. gs, но потом ставят элементы фактически наугад (без какой-либо привязки к направляющим) и в целом располагают контент в 2−3 большие колонки. Не сбивают ли в таком случае направляющие для 12 колонок верстальщика, если по сути они и не задействованы?

Было бы странно, если бы все делали одинаково 🙂 Никогда не делаю никакие слои с сеткой, или горизонтальные направляющие. Есть программный функционал с направляющими, поэтому все дедовские способы с отдельным слоем — ф топку. В принципе, не должно быть в псдшке ни одного лишнего и уж тем более отключенного слоя. Не должен верстальщик еще и на это время тратить (про это скоро напишу в отдельной заметке)

Сетку лучше создавать самому (под необходимую для конкретного случая ширину сайта и желаемые отступы между колонками) или использовать изначально скачиваемые универсальные сетки (снова таки, как предлагается на 960. gs)

Для создания сетки я пользуюсь сервисом gridcalculator.dk

Меня он устраивает на все 100% и все сетки создавал вручную в зависимости от ТЗ. Но в один момент я заметил, что повторяю одни и те же действия (открыл сервис, создал сетку, перенес сетку в фотошоп, закрыл сервис) от проекта к проекту. И чтобы не тратить эти несколько минут на создание очередной сетки, я просто сохранил самые популярные варианты (пустой файл псд шириной 1920 с 12 колонками для контента):

20 или 30 — ширина между колонками. Предпочитаю 30, чтобы не было «широкого дивана с узкими подлокотниками», но иногда и 20 отлично «заходят»

Если ты несколько раз сделал одинаковую работу, подумай: возможно, теперь ты можешь экономить хотя бы несколько минут, чтобы не повторяться

Если нужна какая-то другая сетка, то я создаю ее через gridcalculator.dk

И еще, если можно, один вопрос относительно сетки и адаптивных макетов. Допустим, в Вашем примере ширина контента 1200px и сетка 12 колонок (как понимаю, колонки шириной по 70px и 15px — боковые отступы). Когда Вы будете делать адаптивный psd-макет, скажем под ширину 640px, то уже нужно делать новую сетку (с другой шириной колонок) или использовать эту же сетку, но, соответственно, меньшее число колонок?

Вообще, не правильно сужать расстояния между колонками с уменьшением разрешения файла и при этом сохранять 12 колонок. Иначе на 320 будет совсем месиво из линий, хотя нам нужны будут только 2 крайние направляющие по сути. А если сюда добавить второстепенные направляющие и так называемый вертикальный ритм, то чтобы что-то подвинуть, придется выключать направляющие иначе нифига не будет видно из-за них)

Вот попробуйте разместить элемент шириной (не будем брать экзотический вариант с магическим числом 7) на 8 или 9 колонок в макете 320 пх. Сколько раз вы убьетесь об стену прежде, чем это сделаете? 🙂

Правильно с уменьшением разрешения уменьшать количество колонок и при необходимости их ширину. Например, на планшетах оставлять 8 или 9 колонок, а на смартфонах оставлять 2 или 3. Иначе сетка будет мешать не только верстальщику, но и самому дизайнеру

При адаптивном дизайне я создаю только крайние направляющие и центральную и относительно них все чудесно выравниваю. А при уменьшении разрешения, просто сдвигаю эти направляющие к центру. Не трачу кучу времени на 5 разных сеток (PC + 4 ресайза — не нужно так маньячить) и при этом все аккуратно и ровненько. Вот например, 640:

Привычка все выравнивать через шифт + стрелки решает кучу ненужных проблем)

тносительно горизонтальных направляющих: я раньше отделяла ими ключевые зоны («header», «footer» и т. п.). Мне казалось, что верстальщику должно быть так удобно: выделил по направляющим и сразу видишь, какие размеры. Теперь буду, по Вашему совету, только вертикальные и только для сетки 🙂 (кроме адаптивных макетов, где наоборот: только вспомогательные направляющие и без деления на колонки).

Что хедер, а что футер в 99% случаев видно сразу по макету. К тому же верхняя группа в слоях — хедер, а нижняя — футер. Причем так и подписаны :), думаю, у всех.

Хотела еще уточнить про список Ваших подготовленных сеток (976px, 1170px, 1266px). Вы используете чаще всего именно такие размеры, чтобы под экраны в 1024px, 1200px и 1280px оставались отступы по бокам 24px, 15px и 6px соответственно? Или такие значения ширины предпочтительны по какой-то другой причине?

Все немножко не так:

• Cетка 976 = 1024 — минус ширина скрола справа (18) / поделить на 2 стороны = 15 пх и выглядит на мелком монике ок
• Cетку 1170 использую для мониторов 1280 (1200 просто нет) = 1280 — минус ширина скрола справа (18) / поделить на 2 стороны = 46 пх. Нравится, что получается воздушно по краям.
• Cетку 1266 использую реже. Когда просят сделать ширину 1366 = 1366 — минус ширина скрола справа (18) / поделить на 2 стороны = 41 пх. Тоже воздушно получается по краям. Вообще просили всего 3 раза. А 2 из них и вовсе подряд один за одним. Подумал, бум какой-то начался. Но нет, бума нет. А файлы остались 🙂

Самый популярный вариант 1170 для монитора 1280. Мне больше всего нравится.

Просматриваю сейчас популярные сайты — учусь/пробую определять на глаз используемую изначально дизайнером сетку. Хотела бы уточнить у Вас один момент по построению сетки для сайта, где присутствует неструктурированный «Sidebar».

В Интернет-магазинах в большинстве случаев в ключевой зоне с одного боку выводятся списки категорий, опции фильтрации и т. д., с другого — основной контент, например, с карточками товаров (как на популярных ozon.ru или rozetka.com). Чаще всего, как и на данных примерах, отступы между блоками товаров меньше, чем отступ от боковой колонки до контента (что логично по принципу приближенности связанных элементов). То есть получается, что «Sidebar» здесь не выстраивается по общей сетке, на которой расположены карточки: как тогда лучше демонстрировать такую структуру в psd-макете? Накладывать сетку направляющих только на область с товарами или всё же на всю ширину, несмотря на несовпадение «Sidebar-а»?

Я всегда делаю расстояние от сайдбара больше. Не по сетке. Вот сейчас в работе проект:

Было…

Стало

Убежден, что контент нужно отодвигать дополнительно, чтобы появился воздух и стало ок.

В современных магазинах нельзя использовать 12-колонку. Получится ацтой. Я делаю так:

2 колонки = широкий сайдбар и контент, который делю на 4−5 частей. Между карточками товаров не должно быть расстояния больше, чем 1 пх. Тогда не будет полосатости, и будет все ок (блок номинаций). А вот тут не ок: внутри контента должна быть только одна серая линия, а не 2 серые однопиксельные и широкая белая полоса. При этом на главной запросто может быть своя сетка, ведь мы не будем делать главную с сайдбаром.

Я ошибочно подумала, что любую сетку из направляющих обязательно нужно дробить/сводить только к одинаковой ширины колонкам, а потом уже различным комбинированием (с привязкой) добиваться необходимых размеров блоков. Ваш скрин с отделением направляющими «сайдбара» произвольной ширины помог разобраться и подтвердил, что в этом вопросе я и раньше делала всё правильно:). Спасибо

Не за что 🙂

Правил никаких нет и не будет. Ни у кого. Есть просто советы. Как нет правил, так нет и не будет обязательных к использованию сеток. Любая сетка имеет право на существование, лишь бы сайт получился выровненным, аккуратным и удобным (узкий сайдбар — такой же ацтой, как и чересчур широкий)

Как убрать лишние объекты в фотошопе

Автор: Елена Король. Дата публикации: 22 января 2020. Категория: Обработка фотографий в фотошопе.

Всем привет!

Меня зовут Елена Король и я хочу предложить вам окунуться в мир новых возможностей с обновлёнными и усовершенствованными инструментами Adobe Photoshop 2020. Это первый из серии уроков, посвященных новой версии программы.  Работать мы будем с русскоязычным интерфейсом.  

Часто случается такое, что у нас есть фотография, на которой присутствует ненужный объект, сложный для удаления со снимка (решетка на окне, футбольная сетка, либо плетеный из проволоки забор). Поскольку детали мелкие и их много, то сложно восстановить часть фотографии, которая находится под объектом.  Сегодня в уроке «Как убрать лишние объекты в фотошопе» мы с вами попробуем исправить положение и уберем ненужные объекты с фотографии, используя в основном лишь один инструмент – «Заливку с учетом содержимого». Итак, начинаем.

Все уроки по изучению новых возможностей в Adobe Photoshop 2020:

Для урока я на просторах интернета нашла вот такого милого пса, сидящего за решеткой. Наша задача – убрать сетку так, чтобы не осталось следов. Сохраним фото на свой компьютер.

Открываем фото в программе, нажав «CTRL+O», либо через меню «Файл – Открыть…»

В панели «Слои» переименуем «Слой 1» в «Пёс», дважды кликнув мышкой по названию слоя. Фиксируем измениения, нажав «Enter». В дальнейшем нам будет легче ориентироваться.    

Далее над слоем «Пёс» создаем новый пустой слой. Называем его «Обрисовка».

Выбираем круглую жесткую кись с максимальными настройками: «Режим – нормальный», «Непрозрачность – 100%», «Нажим – 100%». Цвет для кисти подбираем в зависимости от предыдущкго слоя, он должен быть достаточно контрастным. Например, если фото в основном темное – выберем белый, и наоборот. В нашем случае я выберу черный цвет.

Размер кисти подбираем так, чтобы она была чуть-чуть шире решетки.

Далее предстоит самая нудная часть работы – нам нужно обрисовать решетку. Для упрощения этой процедуры применим один лайфхак: ставим первую точку, зажимаем кнопку «Shift» на клавиатуре, затем ставим точку в следующем месте вдоль сетки на рисунке. В результате получаем короткий отрезок. Такими отрезками гораздо быстрее зарисовать всю сетку, чем от руки.

Главное – следить, чтобы обрисовка была максимально точной. Не забываем, что работаем мы на верхнем слое «Обрисовка».

Когда всё закончим, у наас должно получиться вот так:

Если отключим видимость нижнего слоя, то будет выглядеть так:

Далее по обведенному рисунку нам нужно сделать выделение. Для этого зажимаем кнопку «Ctrl» на клавиатуре и кликаем по слою «Обрисовка». Получаем вот такое выделение:

После этого слой «Обрисовка» больше не понадобится, можно его отключить в панели слоев, нажав на глазик.

Далее переходим на слой «Пёс», следим, чтобы выделение было активно.

 Далее заходим в меню «Редактирование» и выбираем строку «Заливка с учетом содержимого…».

Открывшееся окно поделено на три части.

В первой части отображено исходное изображение с выделенной областью:

На второй части видно, что мы получим в результате:

В третьей части прописаны установки инструмента. Проследите, чтобы у вас они соответствовали образцу.

Затем нажмите кнопку «ОК» внизу справа.

Полученный результат уже неплох, но на нем все еще есть места, которые нужно поправить.

Только сначала сольем видимые слои в один, с которым и будем дальше работать. Для этого нажимаем «Ctrl + Alt + Shift + Е (английская раскладка)». Назовем его «Пёс рабочий».

Далее на новом слое, который назовем «Коррекция», мы внесем правки, используя стандартные инструменты «Штамп», «Заплатка», «Восстанавливающая кисть», «Точечная восстанавливающая кисть».

В разных местах нужно использовать различные из вышеперечисленных инструментов. Подбирать, что понадобиться вам, придется методом проб и ошибок.

У меня же после нехитрых манипуляций получилось следующее.

В принципе, почти хорошо. Осталось лишь поработать с дефектом на глазу и царапиной на носу.

Глаз позаимствуем у другой собаки. Для этого в недрах интернета я нашла собаку с похожим цветом глаз. Скопировала глаз и вставила в нужное место.

Рыжую шерсть спрятала под маской.

А как работать с масками, можно прочитать здесь. 

Вот что получилось.

Теперь осталась царапина на носу. У нас есть 2 варианта:

1 – найти нос в интернете и подставить его, как мы это сделали с глазом;

2 – попробовать аккуратно закрасить.

Я выбрала второй вариант.

Итак, над слоем «Пёс рабочий» создаем новый слой и называем его «Нос». 

Берем инструмент «Микс-кисть» и делаем установки как на картинке ниже.

Затем аккуратно начинаем двигать кистью со стороны темного носа к красному, словно растягивая цвет и перекрывая покраснение.

Делаем это короткими штрихами, не нарушая форму носа, оставляя блики.

В результате, если скрыть все остальные слои, на слое «Нос» у меня получилась вот такая клякса.

Поскольку это пятно выглядело более гладким, чем остальной нос, я добавила пятну немного шума. Для этого идем в меню «Фильтр-Шум-Добавить шум». В появившемся окне выставляем «Эффект» силой всего 0,3 и ставим галочку в окошке «монохромный», нажимаем «ОК».

И вот что у нас получилось! Верного пса вполне можно распечатывать и ставить в рамочку. Никакие решетки не будут смущать глаз.

Урок «Как убрать лишние объекты в фотошопе» завершен. А как вам понравился такой способ избавления от сложных ненужных предметов на фото? Довольны ли вы результатом?  Жду ваших откликов.

P.S. Позволю себе дать вам маленький совет: старайтесь работать с хорошими исходниками, и тогда результат вас порадует!

 БЕСПЛАТНЫЕ РАССЫЛКИ УРОКОВ ВКОНТАКТЕ:

Если Вы не хотите пропустить интересные уроки по обработке фотографий в фотошопе — подпишитесь на рассылку.
Форма для подписки находится ниже.

Понравилось? Поделитесь:

Facebook

Twitter

Вконтакте

Одноклассники

Добавить комментарий

Плагин Photoshop Particle для генеративного дизайна

Lattice — это невероятно мощный генератор процедурной решетчатой ​​структуры на основе частиц для Adobe Photoshop (или совместимого хоста). Это новый инструмент для дизайнеров, иллюстраторов и цифровых художников для создания генеративного дизайна. В сочетании с традиционным коммерческим дизайном Lattice добавляет техническую изысканность.

Сетевой графический интерфейс

Основная функция решетки

— соединять частицы линиями и точками.Первоначально частицы создаются в форме трехмерного куба, сферы или цилиндра, а затем ими манипулируют с помощью эффекторов . Когда две частицы находятся на определенном расстоянии друг от друга, они соединяются. Эта простота упорядоченного хаоса — вот что делает контент, созданный с помощью Lattice, таким визуально захватывающим.

Lattice предоставляет широкий спектр возможностей для идеального внешнего вида вашей конструкции. Размеры линий и пунктов могут быть привязаны друг к другу или полностью независимы.На прозрачность линий и точек может влиять глубина, а на прозрачность линий также влияет длина. Укажите минимальное и максимальное расстояние между частицами, необходимое для соединения, а также максимально допустимое количество соединений.

Lattice создает потрясающие изображения для улучшения вашей дизайнерской работы.

Эффекторы

Lattice, сердце плагина, могут создавать всевозможные динамические эффекты, такие как шум, турбулентность, масштаб, смещения, вращения, перекосы, сужения, скручивания, изгибы, волны и удаления.Комбинируя несколько эффекторов вместе, вы можете создавать поистине потрясающие конструкции с неограниченными вариациями. Кроме того, каждый эффектор имеет свои собственные поля аффективного пространства, так что вы можете изменять только определенные части массива частиц. Регулятор спада позволяет мягко размыть эффект, в то время как другие функции, такие как инверсия поля и ось поля, позволяют бесконечно точно настраивать ваш эффект.

Эффекты шума и турбулентности предоставляют свои собственные начальные значения, поэтому вы можете иметь бесконечное количество генеративных эффектов.Удалить позволяет удалять частицы из определенных областей, что приводит к созданию полностью настраиваемых структур.

Красота Решетки заключается в простоте ее воспроизводящего «я».

Lattice не останавливается на достигнутом. Обладая очень мощным механизмом раскраски, каждая частица может унаследовать собственный уникальный цвет в зависимости от оси или положения. Окраска может быть продиктована одним цветом, смесью двух цветов в любом количестве трех измерений, распределением цветового спектра в любом количестве измерений и даже цветами изображения, полученными из исходного изображения, тем самым облегчая интеграцию в существующие изображения.Цвета линий и точек можно индивидуально переопределить для пользовательского цвета, а интенсивность линии может быть получена из длины линии, что приведет к великолепному затенению.

Взаимосвязанные частицы могут иметь цвета, смешанные между двумя, что приводит к градиентам, или усреднение для получения более графических результатов.

Lattice также имеет имитацию глубины резкости! Легко перемещайте частицы в фокус или не в фокусе в пределах плоскости просмотра. Отрегулируйте объектив для увеличения или уменьшения поля зрения и преувеличенной перспективы.

Решетка может легко создавать структуры с высокой или низкой плотностью.

Lattice также может похвастаться возможностью импорта моделей OBJ! Это означает, что вы можете создать свою собственную 3D-модель в любом программном обеспечении и импортировать ее в Lattice. Оказавшись внутри, вы можете вращать, масштабировать и перемещать вашу модель, а также использовать эффекторы для управления ею, как и любой встроенный массив частиц Lattice. Работа с пользовательскими 3D-моделями внутри Lattice предоставляет безграничные творческие возможности.

Помните, что, используя поля эффекторного пространства, вы можете настраивать любые определенные части вашей модели OBJ, включая уменьшение растушевки.

Lattice может импортировать модели OBJ, созданные с помощью выбранного вами программного обеспечения.

Lattice предоставляет большой, упрощенный и удобный интерфейс со всеми необходимыми функциями, которые вы ожидаете. Строка состояния в реальном времени отображает статистическую информацию, такую ​​как тип объекта, активное количество точек и линий, количество используемых в настоящее время эффекторов и количество кадров в секунду (FPS) для показателей производительности.Любой объект можно сохранить или получить одним нажатием кнопки.

Загрузите Lattice сейчас и попробуйте демоверсию. Решетка добавляет уровень сложности вашей работе, что делает ее незаменимым плагином в арсенале любого художника и дизайнера.

Lattice является 100% многопоточным, способным использовать неограниченное количество ядер для максимальной скорости.

Lattice поддерживает режимы цвета 8 бит / канал и 16 бит / канал для профессиональных рабочих процессов.

Рабочий процесс

Решетка работает, соединяя точки из массива частиц, которыми манипулируют с помощью различных предопределенных компонентов.Эти компоненты называются эффекторами , а список этих эффекторов называется стеком . Стек определяет структуру целиком и благодаря своему рабочему процессу обеспечивает неразрушающую настройку. Стек является наиболее важной частью графического интерфейса Lattice, и четкое понимание его работы гарантирует, что вы получите от программного обеспечения максимальную отдачу.

Каждый эффектор, помещенный в стек, содержит свой собственный уникальный набор параметров, основанный на типе эффектора, которым он является.Например, эффект турбулентности или волны будет использовать параметр шкалы , а шумовой эффектор — нет. Другие эффекторы изменяют ползунки эффектов X, Y и Z. Например, эффектор масштабирования сбрасывает диапазоны от 0 до 200, а эффектор преобразования сбрасывает диапазоны от -200 до 200. Эффектор удаления будет использовать только элементы управления радиусом и положением X, Y, Z. Каждый эффектор можно тщательно отрегулировать с помощью этих параметров для достижения желаемого внешнего вида.

Советы по рабочему процессу

Решетка выполняет некоторые длительные вычисления.Поэтому важно знать, какие функции и как влияют на производительность. Lattice всегда будет отображать текущий FPS, что является хорошим индикатором уровня производительности. Lattice был построен на простоте, и лучшие эстетические результаты часто получаются при работе с объектами с низкой плотностью.

• Наибольшее снижение производительности достигается за счет количества линий, определяемых количеством соединяющихся частиц. Строка состояния будет активно отображать, сколько точек и линий нарисовано.Если вы случайно установили слишком много частиц, вы можете отменить текущую обработку, нажав escape .
• Глубина резкости может снизить производительность, поскольку требует увеличения размера линий и точек.
• Размер (толщина) линии также может снизить производительность, если линии слишком толстые.
• Уровень масштабирования окон предварительного просмотра может существенно повлиять на производительность. Меньшее окно предварительного просмотра приведет к гораздо более высокой производительности.
• Эффекторы не сохраняются при каждом вызове.Если вы примените или отмените фильтр, ваши эффекторы будут потеряны. Поэтому рекомендуется сохранить свою работу перед выходом из фильтра.
• Объекты OBJ не сохраняются при каждом вызове. Если вы примените или отмените фильтр, ваш загруженный объект OBJ будет потерян. В результате рекомендуется сохранить свою работу перед выходом из фильтра и перезагрузить объект OBJ.

Параметры объекта

Тип объекта: указывает, какой тип объекта использовать для исходного массива частиц.Возможные варианты: кубический массив, сферический массив, цилиндрический массив или модель OBJ. Переключение с одного объекта на другой уничтожит текущий объект. Однако активные эффекторы останутся в памяти. Это означает, что вы можете переключиться с кубического массива на сферический, сохранив при этом все ваши предопределенные эффекторы.

Решетка позволяет импортировать объект OBJ. После импорта вы можете применить любые эффекторы, как если бы вы использовали куб, сферу или цилиндрический массив. Имейте в виду, что некоторые объекты OBJ могут быть очень плотными и поэтому могут влиять на производительность.

Загрузить OBJ: когда модель OBJ выбрана из раскрывающегося списка типа объекта, эта кнопка переключает загрузчик файлов. При загрузке объекта OBJ будет отображаться количество загружаемых точек.

Сетка X, Y, Z: указывает количество частиц по осям X, Y и Z соответственно для кубического массива, сферического массива или цилиндрического массива. Когда выбрана модель OBJ, эти ползунки неактивны.

X, Y, Z Pos: преобразование частиц по осям X, Y и Z соответственно.

Масштаб X, Y, Z: масштабирует частицы по осям X, Y и Z соответственно.

Rot X, Y, Z: вращает частицы по осям X, Y и Z соответственно. Вы можете интерактивно вращать объект, щелкая и перетаскивая в окне предварительного просмотра.

Ближний клип: указывает ближнюю плоскость отсечения. Любые частицы за пределами ближнего диапазона отсечения не будут отрисованы.

Дальний клип: определяет дальнюю плоскость отсечения. Любые частицы за пределами дальнего диапазона отсечения не будут отрисованы.

Объектив: определяет поле зрения. Увеличенный объектив преувеличивает перспективу.

DOF: определяет глубину резкости. Смоделированная глубина резкости решетки позволяет расфокусировать частицы, выпадающие за пределы заданной глубины.

Фокус: указывает плоскость фокусировки для глубины резкости. Частицы вне этой плоскости расфокусируются.

Точки рендеринга: переключает рендеринг точек.

Переопределение цвета точки: указывает, использовать ли унаследованный цвет точки или пользовательский цвет точки.

Образец переопределения цвета точки: указывает пользовательский цвет точки.

Размер: указывает размер в пунктах. Если включены Lock Point и Line Size , это также повлияет на размер линии.

Intensity: Определяет интенсивность точки.

Точка фиксации и размер линии: фиксирует точку и размер линии. Регулировка размера точки соответственно устанавливает размер линии и наоборот.

Непрозрачность перспективы: определяет прозрачность точек и линий в зависимости от глубины. Чем дальше будут задние частицы, тем прозрачнее они станут.

Render Lines: Включает отображение линий.

Переопределение цвета линии: указывает, использовать ли унаследованный цвет точки или пользовательский цвет линии.

Образец переопределения цвета линии: указывает пользовательский цвет линии.

Непрозрачность длины линии: указывает прозрачность линии в зависимости от длины. Чем длиннее линии, тем прозрачнее они станут.

Режим интерполяции цвета линии: указывает, смешивать ли цвета между двумя точками или усреднять их.

Размер: определяет толщину линии. Если включены Lock Point и Line Size , это также повлияет на размер точки.

Intensity: определяет интенсивность линии.

Max Connections: указывает максимальное количество соединений, разрешенное для одной частицы, если две частицы находятся на минимальном и максимальном расстоянии друг от друга. Чем больше соединений, тем больше линий будет нарисовано.

Минимальная длина: указывает минимальную длину, необходимую для соединения.Для соединения две частицы должны быть больше этого расстояния.

Максимальная длина: указывает максимальную длину, необходимую для подключения. Для соединения две частицы должны быть меньше этого расстояния.

Параметры стека

Каждый эффектор имеет собственный набор параметров. Некоторые эффекторы используют одни контроллеры, а другие — нет. На изображении ниже описаны функции каждого эффектора. Помните, что поистине уникальные результаты возникают, когда эффекторы объединяются и воздействуют только на определенные части объекта с использованием пространственных полей.

Эффекторы: указывает, какой эффектор добавить в стек. В настоящее время Lattice поддерживает 11 предопределенных эффекторов. Каждый имеет собственный набор регулируемых параметров. Эти эффекторы включают шум, турбулентность, масштаб, смещения, вращения, перекосы, конусности, скручивания, изгибы, волны и удаления.

Стек: В стеке перечислены эффекторы, составляющие решетку. Щелчок по эффектору обновит графический интерфейс и отобразит его конкретные параметры. Регулировка параметра обновит решетку в окне предварительного просмотра.

Имя: отображение имени выбранного в настоящий момент эффектора. Любой эффектор можно переименовать в более наглядное для удобства использования.

Операторы стека

Операторы стека используются для перемещения и управления эффекторами внутри стека. Это полезно с организационной точки зрения, чтобы удерживать вместе наборы эффекторов. Важно помнить, что эффекторы не сохраняются в памяти после применения или отмены фильтра. В результате важно сохранить решетку для использования в будущем.

Удалить: Удаляет текущий выбранный эффектор. Удаление нельзя отменить.

Дублировать: Создает копию текущего выбранного эффектора (с текущими параметрами) и помещает ее в нижнюю часть стека.

Solo: изолирует и отображает только текущий выбранный эффектор. Это полезно для работы с конкретным эффектором и отображения его без остальной части решетки для ясности.

Move Up: перемещает текущий выбранный эффектор на одну позицию вверх в стеке.Это изменение порядка эффекторов может повлиять на структуру решетки.

Move Down: перемещает текущий выбранный эффектор на одну позицию вниз в стеке. Это изменение порядка эффекторов может повлиять на структуру решетки.

Параметры эффектора

Поле пространства дисплея: у каждого эффектора есть поле пространства. Это сферическая область, определяющая аффективную область эффектора. Все, что находится в этом поле (или за его пределами, в зависимости от настроек), будет иметь эффект эффектора.Эта кнопка переключает отображение поля пробела.

Цвет поля пространства: определяет цвет поля пространства. Если вы работаете на светлом фоне, вы можете указать более темный цвет поля пространства, чтобы видеть его более четко.

Invert Space Field: переключение этой кнопки повлияет на все частицы за пределами космического поля, а не внутри.

Ось объекта / Ось поля: Определяет исполнительную ось. Если установлено значение object, частицы будут масштабироваться (например) по оси, расположенной в центре объекта.Если установлено поле, частицы будут масштабироваться (например) по оси, расположенной в центре эффектора. Переключение между этими двумя может дать очень интересные результаты.

Seed: задает случайное начальное число для генерации случайных значений. Некоторые эффекторы, такие как шум и турбулентность, требуют случайных значений. Для других эффектов этот ползунок не действует.

Радиус: Определяет радиус космического поля. Все в этом поле будет затронуто эффектором.

Falloff: Определяет радиус спада эффектора. Спад уменьшает эффект эффектора между радиусом и спадом, тем самым создавая более плавный переход между затронутыми и незатронутыми частицами.

Масштаб: определяет масштаб турбулентности и волновых эффекторов. Для других эффектов этот ползунок не действует.

X, Y, Z Effect: Определяет интенсивность эффекта для каждой оси.

Поле X, Y, Z: Определяет расположение космического поля по отношению к объекту.

Параметры интерфейса

Строка состояния: отображает соответствующую информацию о текущей решетке, включая тип объекта, количество точек, количество строк, количество эффекторов и FPS (кадров в секунду).

Масштаб: указывает уровень масштабирования окна предварительного просмотра. Работа с небольшими окнами предварительного просмотра может значительно повысить производительность.

Color Mode: Определяет режим окраски для частиц. Варианты включают:

• Один цвет: использует первый образец цвета для всех цветов точек и линий.
• Двойной цвет: переход между первым и вторым образцами цвета для всех цветов точек и линий.
• Spectral Color: Использует спектральную окраску для всех цветов точек и линий.
• Цвет изображения: использует цвета текущего изображения для всех цветов точек и линий. Это полезно для интеграции решетчатых структур в существующие изображения за счет использования той же палитры.

Color Axis: указывает ось раскраски, через которую назначается цвет. Варианты включают:

Элементы управления

Axis будут работать только с двойным цветом и спектральным цветом .Загрузка объекта OBJ распределяет линейное смешение между двумя образцами цвета, если выбран двойной цвет , или линейное смешение между спектрами, если выбран спектральный цвет .

Образец цвета A: указывает первый образец цвета.

Образец цвета B: указывает второй образец цвета.

Обмен местами: меняет местами цвет A на цвет B.

Перспективная проекция: Включает использование перспективной проекции. Отключение этого приведет к ортогональной проекции.

Blending Mode: определяет режим наложения. Обычная смесь обычно составляет решетку, а Additive Blend — аддитивно. Это то же самое, что и при использовании режима Photoshop Linear Dodge .

Насыщенность: указывает уровень насыщенности при использовании режима спектральной окраски. Этот элемент управления станет активным, когда будет выбран спектральный цвет .

Seed: Определяет (и изменяет) глобальное случайное начальное число для всех эффекторов, которые зависят от случайных величин, таких как шум или турбулентность.Это глобальное семя повлияет на все эффекторы. Изменение начального значения эффектора в разделе Effector Paramenters повлияет только на текущий выбранный эффектор.

Reseed: произвольно сбрасывает глобальное начальное значение.

История изменений

• v1.0 — Первый выпуск.
• v1.1 — Исправлено некорректное отображение логотипа при использовании больших шрифтов или DPI.
• v1.1 — Центрированный интерфейс для отображения экрана при первом запуске.

Особая благодарность

Если вы приобрели коммерческую лицензию, вы должны активировать свое программное обеспечение.Вы можете вручную активировать свое программное обеспечение в любое время, войдя в свою учетную запись. Активация этого программного обеспечения проста и требует всего пяти простых шагов:

1 — Войдите в свою учетную запись, нажав кнопку «Учетная запись» в верхнем меню.

2 — Щелкните ПРОСМОТР , чтобы отобразить детали заказа, содержащие продукт, который вы хотите активировать.

3 — Введите код запроса и щелкните СОЗДАТЬ ЛИЦЕНЗИЮ . См. Ниже информацию о том, как получить код запроса.

Ваш код запроса можно найти, нажав кнопку справки установленного программного обеспечения.

4 — В приглашении к файлу будет предложено сохранить файл лицензии. Вы должны сохранить этот файл лицензии в той же папке, в которой находится плагин. Ниже приведен пример для Photoshop CS6.

Если вы используете Photoshop CC (например, версии 2013–2019 или новее), ваши плагины Photoshop хранятся в папке, доступной для всех версий Photoshop CC, показанных ниже.

5 — Перезапустите Adobe Photoshop, откройте изображение и щелкните Фильтр> Ричард Розенман> Имя фильтра. Если фильтр неактивен, возможно, он не поддерживает текущую глубину цвета изображения.

В строке заголовка ваше программное обеспечение должно теперь отображать ЗАРЕГИСТРИРОВАНО . Теперь он разблокирован и готов к использованию.

«Я всегда учусь новому, тренируюсь и обдумываю интересные задачи»: Эми Луо о повышении уровня в Lattice

Эми Луо — старший дизайнер продуктов в Lattice, где она проработала более года. Здесь мы поговорим с ней о ее пути к продуктовому дизайну (в нем участвуют собаки), ее любимом канале Slack на работе и о том, как она профессионально выросла с тех пор, как присоединилась к Lattice.

Как вы начали заниматься дизайном продуктов?

В детстве я всегда был «вычурным ребенком» и любил рисовать (и собак — я нарисовал лот собак). Когда я стал старше, я начал проводить время в Интернете и мечтал создать свой собственный веб-сайт. Поскольку я очень любил собак, я был очень увлечен виртуальными домашними животными, такими как Neopets и компьютерные игры Petz. Друг семьи дал мне копию Photoshop, и я научился HTML разрабатывать и кодировать веб-сайты для моих виртуальных питомцев.

В конце концов я получил степень в области визуальных коммуникаций и обнаружил, что меня привлекает дизайн продукта и пользовательский опыт, потому что мне было очень интересно слияние искусства и психологии.

Что вас привлекло в Lattice?

На поверхностном уровне мне просто понравился дизайн. Поскольку Lattice был дизайнером и использовал другие инструменты рабочего места в сфере управления персоналом, у которых плохой пользовательский опыт и неотшлифованный пользовательский интерфейс, он действительно выделялся как продукт с высоким уровнем мастерства и продуманными намерениями.

На более глубоком уровне я связался с миссией и ценностями Lattice — работа не должна быть неприятной, особенно когда мы проводим так много времени в повседневной работе.

Что вам больше всего нравится в работе здесь?

Я знаю, что все так говорят, но работать с группой действительно добрых и умных людей — абсолютное удовольствие. Помимо людей, мне также нравится культура, ориентированная на рост. За время работы в Lattice я заметил заметный личный и профессиональный рост в себе, больше, чем на предыдущих должностях.Мне кажется, что я всегда учусь новому, развиваю новые навыки и обдумываю интересные задачи, поэтому я никогда не чувствую застоя или скуки.

Членом каких ERG вы являетесь?

LOUD (Latticians Organizing for Unity and Diversity) и Lattice Ladies!

Любимый канал Lattice Slack и почему?

# soc-emoji-энтузиасты! Я очень увлечен смайликами Slack и постоянно пополняю свою личную коллекцию.Мне нравится видеть, как люди добавляют все новые / забавные / странные смайлы.

Чем вы увлечены вне работы?

Помимо смайлов Slack? Мне очень нравятся рассказы, поэтому в свободное время я с удовольствием читаю книги и смотрю телепередачи. Я отстала в чтении, так как в прошлом году не ездила на работу, но моя вновь обретенная одержимость корейскими дорамами помогла мне заполнить то время, которое я провожу дома во время пандемии.

Как вы думаете, Решетка помогла вам расти в вашей карьере?

Наличие последовательной и положительной обратной связи между мной и моими коллегами помогло мне преодолеть некоторые из синдрома самозванца и неуверенности, с которыми я боролся в прошлом.По мере продвижения по карьерной лестнице я иногда чувствовал себя застрявшим и не знал, что делать дальше, чтобы стать лучшим дизайнером или более эффективным лидером. Наличие четкой обратной связи и областей для роста, а также поддержка и наставничество со стороны моего менеджера помогли мне преодолеть двусмысленность.

Лучший день на работе?

Команда дизайнеров провела виртуальный выезд в декабре прошлого года, чтобы вместе поразмышлять о прошедшем году и заглянуть в будущее, чтобы составить план на 2021 год. Было весело и приятно вспомнить все, что произошло, отпраздновать наши победы и вместе выразить сочувствие. борьба.Мы также играли в игры между рабочими сессиями и научились делать сыр в конце рабочего дня.

Мой сыр, кстати, получился оооочень неплохим.

Cheez Its или Золотая рыбка?

Золотые рыбки, потому что они имеют форму рыбок — такие милые! Но из сырных крекеров я предпочитаю Ritz Bits с сыром.

Lattice работает с командами специалистов по всему миру, чтобы превратить менеджеров в лидеров, сотрудников — в высокопроизводительных сотрудников, а компании — в лучшие места для работы.Заинтересованы в присоединении к нашей команде? Посетите нашу страницу «Карьера», чтобы найти все открытые вакансии в различных отделах.

Как быстро и легко удалить фон в Photoshop — Slacker News

Эта статья о том, как удалить фон в Photoshop, остается одной из наших самых популярных статей и была обновлена ​​в 2019 году для Adobe Photoshop 2020.

Photoshop предлагает множество различных методов удаления фона с изображения. Для простых фонов использование стандартного инструмента «волшебная палочка» для выбора и удаления фона вполне может быть более чем адекватным.Для более сложных фонов вы можете использовать инструмент «Ластик для фона».

Инструмент «Ластик фона» выбирает цвет в центре кисти, а затем удаляет пиксели того же цвета, что и вы «рисуете». Освоить инструмент не так уж и сложно. Позвольте мне показать вам, как это работает.

Удаление фона, шаг 1. Откройте изображение

Начните с захвата изображения, с которого вы хотите удалить фон. Я буду использовать изображение ниже, так как на нем есть области, которые варьируются от простых до более сложных.Я получил это бесплатно на Unsplash.

Теперь откроем его в Photoshop.

Удаление фона, шаг 2: Выберите средство для удаления фона

Выберите инструмент «Ластик для фона» на панели инструментов Photoshop. Он может быть скрыт под инструментом «Ластик». Если это так, просто нажмите и удерживайте инструмент «Ластик», чтобы открыть его. Кроме того, вы можете нажать Shift + E , чтобы просмотреть все инструменты ластика, чтобы добраться до Background Eraser.Если у вас был выбран инструмент «Ластик по умолчанию», дважды нажмите Shift + E , чтобы выбрать инструмент «Ластик для фона».

Удаление фона, шаг 3. Настройте параметры инструмента

На панели параметров инструмента в верхней части экрана выберите круглую жесткую кисть. Наиболее подходящий размер кисти зависит от изображения, над которым вы работаете. Используйте квадратную скобку ( [ или ] ) для быстрого изменения размера кисти.

Кроме того, вы можете щелкнуть правой кнопкой мыши в любом месте монтажной области, чтобы изменить размер и жесткость кисти.

Затем на панели параметров инструмента убедитесь, что для параметра Sampling установлено значение Continuous (это первый из трех значков), Limits to Find Edges * и * Tolerance имеет диапазон 20 -25% .

Примечание: меньший допуск означает, что ластик подберет меньшее количество цветовых вариаций. В то время как более высокий допуск расширяет диапазон цветов, которые выберет ваш ластик.

Удаление фона, шаг 4: начало стирания

Наведите кисть на фон и начните стирать.Вы должны увидеть круг размером с кисть с маленьким перекрестием в центре. Перекрестие показывает «горячую точку» и удаляет этот цвет везде, где он появляется внутри области кисти. Он также выполняет интеллектуальное извлечение цвета по краям любых объектов переднего плана, чтобы удалить «цветовые ореолы», которые в противном случае могли бы быть видны, если объект переднего плана наложен на другой фон.

При стирании увеличьте масштаб рабочей области и постарайтесь, чтобы перекрестие не перекрывалось краем переднего плана.Скорее всего, вам придется в некоторых местах уменьшить размер кисти, чтобы случайно не стереть часть объекта на переднем плане.

Сообщение «Как быстро и легко удалить фон в Photoshop» впервые появилось на SitePoint.

Источник: SitePoint

GIMP VS Lattice Engagement — сравнить различия и отзывы?

5 мощных и БЕСПЛАТНЫХ альтернатив Photoshop

GIMP лучше всего подходит для редактирования или обработки фотографий.Это не самый подходящий инструмент для рисования. По сравнению с некоторыми другими бесплатными лучшими альтернативами Photoshop, перечисленными здесь, GIMP требует определенного уровня компьютерных навыков для использования, а его интерфейс не так удобен для пользователя, как другие программы. Другими словами, новичкам может показаться немного сложным приступить к редактированию изображений с помощью GIMP ….

68 Лучшие приложения и программное обеспечение для рисования

Это приложение станет свежим глотком воздуха для пользователей Linux. Есть очень мало лучших приложений для рисования, разработанных для Linux, и GIMP — одно из них, вероятно, лучшее среди множества.Хотя GIMP не на одном уровне со многими мощными приложениями, разработанными как для Windows, так и для Mac OS, он по-прежнему остается лучшим программным обеспечением для рисования, разработанным исключительно для пользователей Linux …

7 лучших бесплатных альтернатив Photoshop

Хотя это не всегда так интуитивно, как Photoshop, с точки зрения функциональности и дизайна, GIMP компенсирует некоторую кажущуюся неуклюжесть несколькими подробными руководствами как для начинающих, так и для продвинутых пользователей, которые помогут вам использовать большинство его компонентов с минимальными затратами или вообще без них. ранее существовавшие знания о приложении с открытым исходным кодом.С учетом сказанного, если вы ищете только самое …

12 лучших бесплатных альтернатив Photoshop, которые стоит попробовать

GIMP имеет много проблем. Хотя вы можете создавать предустановленные кисти, сами кисти не должны иметь отдельных настроек, поэтому вам придется повторно загружать форматирование для каждой кисти каждый раз, когда вы меняете местами. Скажем, вы меняете ластик с кисти, имеет такое же форматирование, как и кисть. Это раздражает и занимает немного больше времени. Я использую GIMP для редактирования фотографий, которые я делаю на других…

Бесплатная альтернатива Photoshop: нет, это не GIMP

На протяжении многих лет я пробовал такие приложения, как Pixlr и Snapseed, для редактирования фотографий. Это довольно хорошие приложения, но я не видел, чтобы они конкурировали с Photoshop. Практически каждый сторонник бесплатного программного обеспечения с открытым исходным кодом уговаривал меня попробовать GIMP . И хотя GIMP определенно конкурирует с Photoshop, я никак не мог к этому привыкнуть. С другой стороны, Photopea конкурирует с Photoshop и делает …

Настраиваемые формы решетки

Photoshop Elements Обзор Csh

Решетка Пользовательские формы для Photoshop и Elements (CSH) V188

www.graphicxtras.com — Пользовательские формы решетки для Adobe Photoshop и Elements CSH PC и MAC OS X V188

Решетки нестандартных форм для Photoshop и элементов
100 Потрясающих решетчатых форм для использования в Adobe Photoshop Creative Cloud CC и CS6 CS5 CS4 CS3 CS2 CS1 7 6 и т. Д., А также в ПК Adobe Photoshop Elements 14-1 (Windows 8, Windows 7, Windows Vista и т. д.) и MAC OS X (10,8 10,7 10,6 и т. д.). Формат CSH

Коммерческое использование
Все формы решетки предназначены для коммерческого и личного использования, все бесплатны, используются для создания предметов для продажи, таких как плакаты, книги, дизайны, веб-страницы, произведения искусства, логотипы, шаблоны, реклама, видео, упаковочная бумага , буклеты и многое другое — все дизайны графические.com (Эндрю Бакл).

Решетки высочайшего качества для любой работы — все векторы решетки для работы любого размера. Используйте формы решетки в качестве источника для создания потрясающих новых кистей Photoshop, узоров Photoshop, масок, выделений, контуров, перекрашивания, изменения, искажения, экспорта в другие приложения и многого другого. Все дизайны — это векторы для любого объема работы. Все они представлены в стандартном формате фигур Photoshop CSH.
Вопросы о решетчатых формах
Свяжитесь с нами, если у вас есть какие-либо вопросы о дизайне нестандартных фигур Photoshop ([электронная почта защищена]) или просмотрите демонстрации на графических элементах.com, а также ознакомьтесь с нашими видеоуроками по пользовательским формам на Youtube
Установка решетчатых форм
Установите пользовательские формы CSH с помощью команды открытия файла, а также с помощью палитры пользовательских форм загрузки / замены — используйте с инструментом фигур в Набор инструментов Photoshop. Также формы можно использовать с инструментом для формования печенья, а также с инструментом размытия формы

.

Adobe и Photoshop являются зарегистрированными товарными знаками Adobe Systems Incorporated

Цена за единицу: 6,83 евро
Итого: 6 евро.83
плюс 19% налог с продаж / НДС до 6,83 евро: 1,30 евро
8,13 евро
Доставка: Скачать
Опция: Защита загрузки (Продолжительность: 24 месяца) [Информация]
Размер файла: Полная версия: 1,3 МБ
Время загрузки: Полное версия
56k: ~ 3 мин.
DSL / кабель (1/8/16 Мбит): <1 / <1 / <1 мин.
Общие требования: Пользовательские формы для Adobe® Photoshop® Creative Cloud, CS6-6 (и автономных версий) + Adobe® Photoshop® Elements 14-1 Межплатформенный ПК и MAC OS X

Теги: lattice custom формы, формы решетки, Adobe Photoshop, Adobe Photoshop Elements, Adobe Photoshop Creative, стандартный Photoshop CSH, решетка высшего качества, новые кисти Photoshop, инструмент фигур, Elements CSH PC, MAC OS, потрясающая решетка, векторы решетки, пользовательский Photoshop, Photoshop шаблоны, набор инструментов Photoshop, CS3 CS2 CS1, Adobe Systems Incorporated, Creative Cloud, формат CSH, пользовательский CSH, инструмент размытия формы, инструмент для вырезания печенья, команда открытия файла, кроссплатформенный ПК, EUR, OS X V188, Cloud CC, Andrew Buckle, 14-1 ПК, веб-страницы, графические файлы.com, видеоуроки, цена за единицу, время загрузки, загрузка палитры, общие требования, защита загрузки, налог с продаж / НДС, автономные версии, размер файла, reg, amp, дизайн, работа, windows, min, lt, вопросы, объявления

Точечный деформатор решетки

для Maya

Текст поиска идет сюда

Ограничить поиск до …

Результаты предварительного просмотра недоступны, если установлены флажки.

Совместимость: Все программное обеспечение3dsmax после эффектовaliasautodesk vizblenderbody paintcinema4dcombustiondigital fusionfinal cutflamelightscapelightwavemayamodomotionnukepainterphotoshoprendermanrhino3dshakesketchupsoftimagevrayxsizbrush

Категория:
Все категории3D-модели3D-файлы данных о движении3D-текстурыДействиеАльфы (формы кистей) ПриложенияПоведениеРисунки персонажейФильтрыFlash-файлыГенераторыgizmosНастройки освещенияМакросМатериалыPaint FX BrushesPaint EmittersPlug-insReplicatorsScene FilesScripts / PluginsShaders Videos

Форум:
Все форумы — Maya — 3ds Max — Создание — wip — Без категорий — Xsi — Архивные — Персонал — Зал — Анимация и оснастка

Категория:
Все категории3D-модели3D-файлы данных о движении3D-текстурыДействияАльфы (формы кистей) ПриложенияПоведениеОбои с персонажамиФильтрыFlash-файлыГенераторыgizmosНастройки освещенияМакросМатериалыPaint FX BrushesPaint EmittersPlug-insReplicatorsScene FilesScripts / PluginsShaders

Категория:
Все Categories3D3rd партия appsAnimatingAnimationBasicsBehaviorsCamera / LightingCharacterCharactersColorcompositingDevelopment / APIDisplacement / MapsDynamicsDynamics / FXFiltersFXPlugGames RelatedGeneralgeneral workflowGetting startedgizmo writingHardware / InstallHardware / OSImport / ExportInterface / DisplaykeyingLightingMaterialsMaterials и TexturingModelingModeling / ZspheresPaint FXPainting / RotoParticlesParticles / FXProject WalkthroughsRATRenderingRendering / LightingReplicatorsScriptingScripting / APIShaderstcl scriptingTextTextures / PaintingTexturingTrackingUsing DownloadsUsing инструменты / MacrosUsing инструменты / ScriptsWarping / морфинг

Категория:
Все категорииАбстрактноеАнимеАрхитектураАрхитектура> ЭкстерьерыАрхитектура> ИнтерьерыПерсонажи> Персонажи> 3D Фотореалистичные Персонажи> 3D стилистические Персонажи> Рисованные

Потенциальная роль MATER в формировании цитоплазматической решетки в ооцитах мышей

Аннотация

Фон

Mater и Padi6 являются генами материнского эффекта, которые сначала экспрессируются во время роста ооцитов и необходимы для эмбрионального развития после двухклеточной стадии у мыши.Недавно мы обнаружили, что PADI6 локализуется и необходим для образования многочисленных фибриллярных нерастворимых структур Triton X-100 (Triton), называемых цитоплазматическими решетками ооцитов (CPL). Учитывая сходные профили экспрессии и фенотипы мутантных мышей, мы проверяли гипотезу о том, что MATER также играет роль в образовании и / или функционировании CPL.

Методология / выводы

Здесь мы показываем, что PADI6 и MATER совместно локализуются по всей цитоплазме ооцита после экстракции тритона, предполагая, что MATER совместно локализуется с PADI6 на CPL.Кроме того, растворимость PADI6 резко увеличилась в ооцитах Mater ^{tm / tm} после экстракции тритоном, что позволяет предположить, что MATER участвует в зародышеобразовании CPL. Этот прогноз подтверждается анализом просвечивающей электронной микроскопии ооцитов Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} на стадии зародышевых пузырьков, который показал, что объемная доля CPL была снижена на 90% в Mater ^{tm / tm.} ооцитов по сравнению с Mater ^{+ / +} ооцитов.

Выводы

Взятые вместе, эти результаты предполагают, что, подобно PADI6, MATER также необходим для образования CPL. Учитывая, что PADI6 и MATER важны для женской фертильности, эти результаты не только подтверждают гипотезу о том, что решетки играют критическую роль в опосредовании событий во время перехода от ооцита к эмбриону, но также улучшают наше понимание молекулярной природы CPL.

Образец цитирования: Ким Б., Кан Р., Ангиш Л., Нельсон Л. М., Кунрод С. А. (2010) Потенциальная роль MATER в формировании цитоплазматической решетки в ооцитах мышей.PLoS ONE 5 (9):
e12587.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012587

Редактор: Хью Кларк, Университет Макгилла, Канада

Поступила: 15 июня 2010 г .; Одобрена: 30 июля 2010 г .; Опубликовано: 7 сентября 2010 г.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями декларации Creative Commons Public Domain, которая предусматривает, что после размещения в общественном достоянии эта работа может быть свободно воспроизведена, распространена, передана, модифицированы, построены или иным образом использованы кем-либо в законных целях.

Финансирование: Эта работа была поддержана Национальным институтом детского здоровья и развития человека, грант RO1 38353, предоставленный SAC, и Программой внутренних исследований по репродуктивной и взрослой эндокринологии, предоставленной LMN. В этом исследовании также использовался Корнельский центр исследований материалов при поддержке Национального научного фонда под номером премии DMR-0520404. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Уникальной особенностью ооцитов млекопитающих является то, что транскрипция прекращается при созревании ооцита [1] и не возобновляется до тех пор, пока эмбриональная транскрипция не активируется в раннем эмбрионе [2] — [5]. В течение этого периода транскрипционного покоя ооцит должен полагаться на материнские факторы, структуры и органеллы, которые накопились в ооците во время роста, чтобы опосредовать этот критический период, часто называемый переходом от ооцита к эмбриону (OET).У видов, не относящихся к млекопитающим, анализ мутаций выявил большое количество факторов, называемых генами материнского эффекта (MEG), которые синтезируются и накапливаются в ооците, а затем сохраняются в раннем эмбрионе, где они необходимы для эмбрионального развития [6], [7]. Фенотипический анализ моделей нокаута мышей недавно привел к идентификации нескольких MEG млекопитающих, таких как материнский антиген, который требуется эмбрионам (MATER) и пептидиларгинин дейиназа 6 (PADI6), два очень распространенных белка, ограниченных ооцитами, которые необходимы для эмбрионального развития за пределами двухклеточная стадия [8], [9].

MATER (название гена, NLRP5) был первоначально идентифицирован как антиген, который участвует в аутоиммунном оофорите мышей [10]. Недавно MATER (мать на латыни) был идентифицирован как компонент SCMC (подкорковый материнский комплекс) наряду с другими материнскими факторами, включая FILIA (дочь на латыни), FLOPED и TLE6 [11]. Кроме того, PADI6 также предположительно был идентифицирован как компонент комплекса SCMC. Хотя считается, что FILIA играет роль в стабильности хромосом во время эмбриогенеза [12], роль MATER еще предстоит выяснить.

PADI6 был первоначально клонирован из протеома ооцитов мыши из-за его обилия в ооцитах с задержкой в ​​метафазе II и его ограниченного ооцитами паттерна экспрессии [9]. Интересно, что PADI6 локализован и необходим для образования обильной, ограниченной ооцитами и ранними эмбрионами структуры, цитоплазматических решеток (CPLs или решеток) [9], [13]. Решетки состоят из 5–7 параллельных волокон, каждое из которых содержит повторяющийся элемент ∼20 нм [14]. Связанные волокна сначала наблюдаются на ранних стадиях роста ооцитов (30-40 мкм) [15] и сохраняются в раннем эмбрионе до стадии бластоцисты [16].Было обнаружено, что CPL устойчивы к Triton-X-100 (Triton), таким образом, экстракция этим детергентом является ценным инструментом для изучения белков, ассоциированных с CPL [14], [17]. Хотя CPL наблюдаются с помощью электронной микроскопии с 1960-х годов, их функция остается плохо изученной. Основываясь на электронной микроскопии и биохимическом анализе, в ряде более ранних отчетов было предсказано, что решетки могут функционировать как гранулы желтка [18] или как место хранения рибосом [15], [19] — [23], причем последняя гипотеза поддерживается последние данные нашей лаборатории [24].

Интересно, что Padi6 и Mater имеют много схожих свойств. Например, экспрессия обоих материнских генов регулируется основным транскрипционным фактором спираль-петля-спираль, FIGLA (фактор в зародышевой линии альфа) [25] и ограничивается ооцитами и ранними эмбрионами мыши. Анализ микроматрицы [26] наряду с предыдущими исследованиями [9], [27], [28] предполагает, что оба транскрипта появляются в ооците на стадии примордиального / первичного фолликула, а затем внезапно исчезают во время созревания мейоза.Экспрессия белков MATER и PADI6 примерно соответствует экспрессии их транскриптов в ооцитах; однако уровни белка сохраняются на высоком уровне на протяжении всего доимплантационного развития до стадии бластоцисты [9], [27]. Кроме того, анализ самок мышей Padi6 ^{— / —} и Mater ^{tm / tm} (tm: таргетированная мутация) показывает, что фенотипы эмбрионов, зачатых от этих двух мутантов, поразительно схожи с задержкой развития, происходящей в двухклеточная стадия; вероятно, из-за аномальной активации эмбрионального генома (EGA), о чем свидетельствуют сниженные уровни транскриптов BrUTP и TRC в этих эмбрионах [8], [13], [24].

Основываясь на этих сходствах, мы предположили, что, подобно PADI6, MATER также может играть роль в формировании CPL. Здесь мы показываем, что PADI6 и MATER совместно локализуются по всей цитоплазме ооцита после экстракции тритоном и, по-видимому, оба связаны с большими комплексами схожей молекулярной массы. Кроме того, растворимость PADI6 (маркер CPL) значительно повышена в гипоморфных ооцитах Mater , что позволяет предположить, что решетки значительно уменьшены в ооцитах Mater ^{tm / tm} .В качестве более прямого подтверждения потребности в MATER для образования CPL мы показываем с помощью электронной микроскопии, что объем CPL уменьшается в 9,65 раза на стадии зародышевых пузырьков (GV) Mater ^{tm / tm} ооцитов. Взятые вместе, эти результаты предполагают, что MATER необходим для образования CPL. В настоящее время проводятся исследования для проверки гипотезы о том, что роль MATER в синтезе CPL обусловлена ​​прямым взаимодействием с другими факторами, связанными с CPL, и для дальнейшего изучения функции CPL с использованием модели ооцитов мыши Mater ^{tm / tm} .

Результаты

PADI6 и MATER совместно локализуются в ооцитах и ​​ранних эмбрионах и, по-видимому, связаны с высокомолекулярными комплексами

О локализации MATER и PADI6 сообщалось ранее [9], [27], [28]. Учитывая, что PADI6 в первую очередь локализуется в CPL [9] и необходим для образования CPL [13], мы полагаем, что PADI6 представляет собой хороший маркер для CPL. Поэтому, чтобы начать проверку гипотезы о том, что MATER играет роль в функции CPL, мы сначала провели конфокальную иммунофлуоресцентную микроскопию (CIM), чтобы определить, совпадают ли эти два материнских фактора вместе.Ооциты и эмбрионы фиксировали параформальдегидом (PFA), пермеабилизировали и окрашивали антителами против PADI6 и MATER. Результаты показали, что MATER и PADI6, по-видимому, сильно совместно локализуются в коре и, в меньшей степени, в цитоплазме ооцитов на стадии GV. Совместная локализация также наблюдалась в не противоположных областях коры 2-клеточной и 4-клеточной стадий эмбрионов, при этом меньшая совместная локализация наблюдалась по всей цитоплазме у ранних эмбрионов (Рис. 1A). Интересно, что у двух- и четырехклеточных эмбрионов окраска PADI6 более сильно локализована в коре, чем MATER, которая, как видно, проникает глубже в цитоплазму.CPL представляют собой нерастворимые в тритоне структуры. Поэтому, чтобы более точно проверить гипотезу о том, что MATER локализуется в CPL, мы затем экстрагировали GV-ооциты с 0,1% тритоном в течение 10 минут, а затем провели анализ совместной локализации с использованием CIM. После экстракции тритона цитоплазматический сигнал MATER и PADI6 был значительно усилен по всей цитоплазме ооцита, тем самым обеспечивая косвенную линию доказательств того, что MATER связан с CPL (рис. 1B). Чтобы проверить совместную локализацию MATER и PADI6 в извлеченных ооцитах, был проведен анализ совместной локализации с помощью программного обеспечения Zeiss 2007, и диаграмма рассеяния показывает степень совместной локализации между MATER и PADI6 в извлеченных ооцитах.Перекрытие Мандера и коэффициенты корреляции Пирсона (0,97 и 0,7 соответственно) подтверждают высокую степень колокализации между MATER и PADI6 (рис. 1B).

Рис. 1. Совместная локализация MATER и PADI6 в неэкстрагированных и экстрагированных Triton X-100 ооцитах GV и ранних эмбрионах.

( A ) На конфокальных микроскопических изображениях показаны не извлеченные ооциты на стадии GV, двух- и четырехклеточные эмбрионы после фиксации, пермеабилизации и инкубации с антителами против MATER (зеленый) и анти-PADI6 (красный).( B ) GV-ооциты экстрагировали 0,1% Triton X-100 и окрашивали антителами MATER (зеленый) и PADI6 (красный). Объединенные изображения подчеркивают совместную локализацию MATER и PADI6. График разброса указывает на степень совместной локализации MATER и PADI6. Область A показывает пиксели с высокой интенсивностью MATER (зеленый), область B показывает пиксели с высокой интенсивностью PADI6 (красный), а область C показывает пиксели с высокой интенсивностью MATER (зеленый) и PADI6 (красный). Коэффициент перекрытия Мандера: 0,97, коэффициент корреляции Пирсона: 0.7. ( C ) Лизаты ооцитов мыши CD1 хроматографировали с помощью FPLC. Элюированные фракции (1 мл) анализировали иммуноблоттингом с антителами к PADI6 и MATER. Денситометрию использовали для построения графика, и значения во фракции 11 были установлены на относительную интенсивность 100%. Элюирование каждого стандарта белка указано стрелкой.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012587.g001

Чтобы еще больше усилить потенциальную связь между MATER и PADI6, мы затем разделили белки из экстрактов ооцитов мышей CD1 аутбредных стадий GV с помощью быстрой жидкостной хроматографии белков (FPLC). и элюированные фракции анализировали иммуноблоттингом с использованием антител MATER и PADI6.Результаты показывают, что PADI6 и MATER, по-видимому, совместно элюируются в трех разных фракциях. Начальная фракция с высокой молекулярной массой наблюдается между 2000 кДа и 669 кДа, вторая фракция наблюдается между 669 и 220 кДа, и также виден третий пик, который находится ниже маркера молекулярной массы 200 кДа. Кроме того, фракция PADI6, по-видимому, также элюируется независимо от MATER чуть ниже маркера 200 кДа. Наблюдение за тем, что PADI6 и MATER, по-видимому, совместно элюируются во фракциях с высокой (от ~ 1000 до 2000) молекулярной массой, подтверждает гипотезу о том, что эти два материнских белка связаны с супрамолекулярным комплексом (рис.1С).

Растворимость PADI6 в Triton X-100 повышена в

Mater ^{tm / tm} ооцитов

CPL ооцитов не могут быть визуализированы с помощью EM в Padi6 нулевых ооцитах мышей [24], указывая тем самым, что CPL не образуются в отсутствие PADI6 и что белки, которые обычно связываются с CPL, становятся более растворимыми в мутантных яйцах. Эта идея подтверждается нашим предыдущим открытием, что растворимость рибосомных компонентов в тритоне, таких как S6, значительно усиливается в яйцах Padi6 -null [24].Поэтому мы решили использовать аналогичный подход к мутантным ооцитам Mater для более непосредственной проверки гипотезы о том, что MATER играет роль в формировании и функционировании CPL. Мы предсказали, что если CPL не образуются в ооцитах Mater ^{tm / tm} , то PADI6 (белок, ассоциированный с CPL) должен стать более растворимым после экстракции тритоном. Ооциты GV либо не экстрагировали, либо экстрагировали 0,1% тритоном в течение 10 минут и готовили для CIM, как описано выше. Результаты показали, что в не извлеченных ооцитах уровень и локализация PADI6 были одинаковыми между Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} ооцитов со слегка сниженным уровнем PADI6 в коре головного мозга в Mater ^{tm. / тм} ооцитов.Однако уровни PADI6 были резко снижены в ооцитах Mater ^{tm / tm} после экстракции тритоном (рис. 2A). Чтобы лучше количественно оценить эти результаты, мы провели вестерн-блоттинг неэкстрагированных и экстрагированных тритоном ооцитов. В соответствии с нашими конфокальными данными, иммуноблот-анализ показал, что уровни PADI6 были сходными между ооцитами дикого типа и гипоморфными ооцитами Mater . Однако после экстракции тритона анализ нерастворимой фракции показал, что, хотя уровни β-актина были схожими, количественная денситометрия изображения показала, что уровни PADI6 были снижены на ~ 50% в мутанте по сравнению с контрольными ооцитами дикого типа (рис.2Б). Взятые вместе, эти результаты предполагают, что решетки не образуются (или образуются в меньшей степени) в отсутствие MATER, тем самым высвобождая PADI6 из нерастворимой фракции.

Рис. 2. Растворимость PADI6 Triton X-100 повышена в ооцитах Mater ^{tm / tm} GV-стадии.

( A ) Конфокальный анализ показывает Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} ооцитов на стадии GV до и после экстракции 0.1% Тритон Х-100. Ооциты инкубировали с антителами к PADI6 (красный). ( B ) Вестерн-блоттинг показывает экспрессию белка MATER и PADI6 в ооцитах Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} GV-стадии до и после экстракции 0,1% Triton X-100. Выделенные ооциты либо экстрагировали, либо не экстрагировали Тритоном, а затем оценивали с помощью вестерн-блоттинга с использованием антител против MATER, против PADI6 или против β-актина.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0012587.g002

Морфометрический электронный микроскопический анализ показывает, что объем CPL значительно снижен в M

после ^{мкм / мкм} ооцитов

Чтобы напрямую проверить гипотезу о том, что MATER необходим для образования CPL, мы затем провели морфометрический анализ CPL в ооцитах Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} ооцитов с использованием просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ). . GV-ооциты собирали у трех самок мышей Mater ^{+ / +} и трех самок мышей Mater ^{tm / tm} , фиксировали, заделывали смолой, и ультратонкие срезы блоков помещали на сетку.Затем ооциты были визуализированы с использованием ПЭМ, и затем было проведено количественное определение CPL и других органелл с использованием метода точечного подсчета [29]. Результаты показали, что средняя объемная доля CPL на площадь составляла 5,5% для ооцитов Mater ^{+ / +} и 0,057% для ооцитов Mater ^{tm / tm} , таким образом, объемная доля CPL в Mater ^{tm / tm} ооцитов было уменьшено в 9,56 раза по сравнению с Mater ^{+ / +} ооцитов.Стандартная ошибка среднего (SEM) объемной доли CPL для ооцитов Mater ^{+ / +} составляла 0,0035, а для ооцитов Mater ^{tm / tm} составляла 0,0009 (рис. 3 и рис. 4C). Этот результат обеспечивает прямую поддержку нашей гипотезы о том, что MATER необходим для образования CPL. Важно отметить, что остаточное количество белка MATER присутствует в ооцитах Mater ^{tm / tm} (см. Рис. 2B и обсуждение ниже), что, возможно, объясняет, почему в гипоморфных ооцитах наблюдаются некоторые решетки.

Рис. 3. EM-анализ показывает, что объемная доля CPL снижена в ооцитах Mater ^{tm / tm} .

( A ) Типичное изображение ПЭМ (x11 500) ультраструктуры ооцитов Mater ^{+ / +} GV. На вставке показано изображение структуры решетки с большим увеличением (x26 500). ( B ) Типичное изображение ПЭМ (x11,500), показывающее ультраструктуру ооцитов Mater ^{tm / tm} GV. Стрелки в A и B указывают CPL.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012587.g003

Рис. 4. Mater ^{tm / tm} ооциты демонстрируют повышенный уровень липидных капель.

( A ) ПЭМ-изображения с малым увеличением (x1,700) Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} ооцитов на стадии GV. Ооциты готовили для ТЕА, как указано выше. Белые стрелки указывают на ЛД. ( B ) Конфокальные изображения живых ооцитов на стадии GV Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} ооцитов после окрашивания по Нильскому красному.Изображения ДИК показывают морфологию LD в ооцитах. Крупные изображения (правая панель) выделяют агрегаты LD. Стрелки указывают LD. ( C ) Количественное определение объемных долей CPL, LD, митохондрий и ER в ооцитах Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} GV-стадии. Показано среднее значение ± SEM. Значение P составляет <0,004 для CPL, <0,04 для LD,> 0,05 для митохондрий и ER.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012587.g004

Интересно, что при оценке объема CPL с помощью ТЕА мы также заметили явное увеличение объема липидных капель в ооцитах Mater ^{tm / tm} по сравнению с Mater ^{+ / +} ооциты (рис. 4А). Чтобы количественно оценить это наблюдение, мы затем провели морфометрический анализ LD в ооцитах дикого типа и мутантных ооцитах. Кроме того, мы также оценили объем митохондрий и ER, чтобы выяснить, может ли объем этих органелл быть изменен в ооцитах Mater ^{tm / tm} .Мы обнаружили, что, хотя объемные доли митохондрий и ER были подобны, объем липидных капель увеличился примерно в 7 раз в ооцитах Mater ^{tm / tm} (рис. 4C). Обнаружение того, что объемная фракция митохондрий, по-видимому, не изменилась в ооцитах Mater ^{tm / tm} , представляет интерес в свете предыдущих иммуно-ЭМ данных, показывающих, что MATER частично локализуется в митохондриях. Для проверки этого наблюдения проводятся эксперименты. В подтверждение наших результатов ЭМ об увеличении объемной доли липидных капель в ооцитах Mater ^{tm / tm} мы также заметили, что морфология этих ооцитов отличается от ооцитов Mater ^{+ / +} в этих коричневых агрегатах. наблюдались в ооцитах Mater ^{tm / tm} под диссекционным микроскопом.Чтобы проверить, являются ли эти агрегаты ЛД, мы окрашивали живые ооциты Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} нильским красным, и объединенные изображения показывают, что агрегаты на самом деле являются LD. (Рис. 4B). Наконец, хотя количественная оценка не проводилась, мы также заметили, что LD также имеют тенденцию образовывать более крупные кластеры в ооцитах Mater ^{tm / tm} . Количественное определение CPL и органелл показано на рисунке 4C.

Discussion

В этой рукописи мы определяем новую роль MATER, показывая, что этот продукт гена материнского эффекта, по-видимому, необходим для образования CPL.Наш EM-морфометрический анализ объема CPL в ооцитах дикого типа и Mater ^{tm / tm} обеспечивает наиболее прямое подтверждение этого вывода, поскольку результаты показывают, что объемная доля CPL снижена в ~ 10 раз в Mater ^{. tm / tm} ооцитов по сравнению с ооцитами дикого типа. Здесь важно отметить, что мыши Mater ^{tm / tm} , использованные в этом исследовании, были получены от тех же мышей, которые первоначально были охарактеризованы Тонгом и др. Как Mater null [8].Впоследствии, однако, Ohsugi et al [28] позже документально подтвердили, что эти мыши действительно экспрессируют низкие уровни белка MATER, и поэтому назвали мышей Mater ^{tm / tm} или гипоморфами. Мы подтвердили, что эти мыши действительно экспрессируют низкие уровни белка MATER, и поэтому использовали терминологию гипоморфа Mater ^{tm / tm} для этого отчета. Интересно, что в нашем исследовании наблюдаемое уменьшение объема CPL примерно коррелирует с 90% -ным снижением белка MATER в ооцитах Mater ^{tm / tm} , предполагая, что может существовать прямая стехиометрия 1-1 между MATER и CPL.Другими словами, уменьшение концентрации белка MATER приведет к соответствующему уменьшению числа решетки. Таким образом, путем экстраполяции мы прогнозируем, что решетки будут отсутствовать в истинных нулевых ооцитах Mater .

Что касается роли MATER в формировании решетки, хотя возможно, что MATER действует косвенно (например, как восходящий сигнальный фактор для образования CPL), мы прогнозируем, что роль MATER в формировании решетки является прямой через ассоциации с другими компонентами CPL. .Это предсказание основано на нашем наблюдении, что PADI6 ( bona fide CPL компонент) и MATER совместно локализуются друг с другом по всей цитоплазме и на иммуно-ЭМ обнаружении Таширо, что MATER локализуется в CPL [30]. Следовательно, MATER, по-видимому, представляет собой компонент надстройки CPL. Кроме того, наблюдение, что растворимость PADI6 увеличивается в ооцитах Mater ^{tm / tm} , предполагает, что MATER играет прямую роль в содействии зарождению CPL-ассоциированных белков в зрелую надстройку CPL и что в отсутствие MATER CPL- связанные белки становятся более растворимыми.

Как отмечалось во введении, недавно было обнаружено, что MATER связан и необходим для образования другого супрамолекулярного комплекса, называемого SCMC, который также содержит FILIA, TLE6 и FLOPED. Дальнейшее исследование молекулярной природы этого комплекса обнаруживает, что мыши Mater , Filia и Floped -null необходимы для развития за пределами ранних стадий развития расщепления. На молекулярном уровне анализ FPLC и иммунопреципитации предполагает, что SCMC образуется в результате прямого взаимодействия между FLOPED, MATER и TLE6, в то время как FILIA, по-видимому, связывается с SCMC через прямое взаимодействие только с MATER.На субклеточном уровне эти белки, по-видимому, совместно локализуются в подкорке ооцитов, и эта локализация становится асимметрично ограниченной апикальной цитокортексом двухклеточных эмбрионов. У морул, однако, экспрессия белков SCMC ограничена не противоположной цитокортексом внешних бластомеров, и эти белки не наблюдаются во внутренних клетках. Этот ограниченный паттерн локализации привел к гипотезе, что структура SCMC может обеспечивать молекулярный маркер клонов эмбриональных клеток и, возможно, определения судьбы клеток [11].В то время как роль SCMC в раннем развитии еще предстоит выяснить, анализ мышей Filia -null предполагает, что этот материнский фактор играет важную роль в интеграции пространственно-временной локализации регуляторов эуплоидии и развития клеточного цикла во время раннего развития [12]. .

Интересно, что в совсем недавнем отчете другой группы [30] с помощью электронной микроскопии было охарактеризовано Floped -null ооцитов мышей и обнаружено, что CPL также отсутствуют в этих мутантных ооцитах, что указывает на то, что этот белок SCMC также необходим для образования решетки. .Кроме того, они обнаружили, что в то время как анализ конфокальной иммунофлуоресценции (IF) изолированных ооцитов / эмбрионов предполагал, что FLOPED локализуется в цитокортексе, как показано ранее [11], иммуно-EM анализ показал, что FLOPED в основном локализовался в CPL по всей цитоплазме. Затем исследователи предсказали, что этот конфликт в паттернах субклеточной локализации FLOPED был вызван неспособностью антител anti-FLOPED проникать в кору изолированных ооцитов / эмбрионов, что привело к сильному кортикальному паттерну окрашивания FLOPED.Затем они проверили это предсказание, окрашивая залитые парафином поперечные срезы ооцитов и эмбрионов и обнаружили, что в этих условиях окрашивание FLOPED наблюдалось по всей цитоплазме и не концентрировалось в коре головного мозга. Взятые вместе, результаты Tashiro et al. указывают на то, что FLOPED в первую очередь локализуется в CPL, а также требуется для формирования решетки.

В этом отчете мы сначала документируем совместную локализацию MATER и PADI6 в коре головного мозга невыделенных ооцитов / эмбрионов и по всей цитоплазме ооцитов, экстрагированных Тритоном.Мы прогнозируем, что точечная совместная локализация PADI6 и MATER по всей цитоплазме ооцитов, экстрагированных тритоном, отражает локализацию этих материнских факторов в устойчивых к тритону CPL. Это предположение подтверждается нашим предыдущим иммуно-ЭМ открытием, показывающим, что PADI6 в первую очередь локализуется в CPL, и новой публикацией Tashiro [30], которая показывает, что покрытые антителом MATER золотые частицы также локализуются в CPL. Хотя в настоящее время мы не до конца понимаем, почему конфокальное IF-окрашивание PADI6 и MATER в первую очередь ограничивается корой головного мозга в невыделенных ооцитах, новые данные о локализации FLOPED, сделанные Таширо, повышают вероятность того, что наблюдаемая кортикальная локализация PADI6 и MATER является артефактной по своей природе. .Фактически, мы обнаружили, что соотношение кортикального и цитоплазматического окрашивания PADI6 и MATER в интактных ооцитах может варьироваться в зависимости от используемых условий фиксации и иммуноокрашивания [27], [28]. Альтернативно, также возможно, что MATER и PADI6 связаны с SCMC в коре и с CPL по всей цитоплазме. Гипотеза о том, что PADI6 связан с SCMC, подтверждается предыдущей работой, показывающей, что PADI6 потенциально связан с FLOPED, компонентом SCMC [11].Если эта гипотеза верна, то возможно, что комплексы SCMC и CPL структурно связаны и могут существовать как континуум, который не может быть разрешен с помощью электронной микроскопии. Таким образом, PADI6, MATER и, вероятно, другие белки могут перемещаться между CPL и SCMC. Интересно, что наши данные FPLC могут предоставить некоторую поддержку этому прогнозу. Наш анализ показывает, что PADI6 и MATER, по-видимому, совместно элюируются в трех отдельных фракциях. Начальная высокомолекулярная фракция (от ~ 670 до 2000) по массе аналогична той, которая показана для MATER и других компонентов SCMC в предыдущем отчете [11].Этот вывод подтверждает гипотезу о том, что PADI6 является компонентом SCMC. В нашем исследовании наблюдаемый пик совместной элюции в среднем диапазоне от ~ 200 до 670 кДа повышает вероятность того, что MATER и PADI6 также могут быть связаны с меньшим комплексом, который либо не может быть напрямую связан с конкретной структурой. Мы отмечаем, что пики совместной элюции MATER и PADI6 с самой низкой молекулярной массой значительно ниже маркера массы 200 кДа, и предсказываем, что эти фракции представляют собой мономерные формы PADI6 и MATER. Хотя в настоящее время неясно, почему Ли и др. Также не наблюдали средние и более низкие пики MW для MATER в своем исследовании, сравнение протоколов показывает, что мы использовали колонки разного размера, которые могли повлиять на разрешение белка.Кроме того, мы также добавили 0,1% Trition к нашему буферу для лизиса ооцитов, что могло повлиять на растворимость белка. В настоящее время остается неясным, является ли связь между PADI6 и MATER прямой или косвенной. Для этого исследования мы предприняли многочисленные эксперименты по совместной иммунопреципитации и не смогли показать взаимодействие между PADI6 и MATER. Интересно, что, учитывая, что PADI6 был идентифицирован как потенциальный партнер для взаимодействия с FLOPED и что FLOPED напрямую взаимодействует с MATER, возможно, что PADI6 и MATER косвенно связаны посредством взаимодействий с FLOPED.

Неожиданный результат этого исследования заключался в том, что, помимо снижения CPL в ооцитах Mater ^{tm / tm} , в мутантных ооцитах значительно увеличился объем липидных капель. LD представляют собой динамические органеллы, которые, как считается, хранят энергию в форме нейтральных липидов, таких как триацилглицерины и сложные эфиры стерола [31]. Несмотря на значительный прогресс в исследованиях LD в последние годы, фундаментальные механизмы функционирования LD остаются в основном неизвестными.Это особенно верно для ооцитов млекопитающих, так как имеется лишь несколько сообщений, предполагающих роль LDs в функции ооцитов [32] — [35]. Интересно, что накопление LD часто наблюдается при патологических состояниях, таких как апоптоз, рак и воспаление [36]. Недавнее сообщение обнаружило взаимодействие между MATER и PKC {epsilon}, которое участвует в антиапоптотическом пути [36], [37]. Если MATER действительно связан с антиапоптотическим сигнальным путем, накопление LD в ооцитах Mater ^{tm / tm} может быть связано с апоптотическими событиями.Важно отметить, что наши результаты показывают, что Mater ^{tm / tm} мышей представляют собой ценный инструмент для изучения функции LD в ооцитах.

В заключение, в этом исследовании мы показываем, что MATER требуется для образования CPL, а также, по-видимому, представляет собой компонент надстройки CPL. В свете нового открытия Таширо, что другой компонент SCMC, то есть FLOPED, также необходим для образования CPL, и что PADI6 был идентифицирован в предполагаемых взаимодействующих белках FLOPED, наши новые результаты теперь подчеркивают потенциальную связь между SCMC и CPL.Кроме того, учитывая ограниченную для ооцитов / эмбрионов природу PADI6 и MATER и что все эти факторы важны для ранних делений дробления, эти находки дополнительно подчеркивают важность CPL в опосредовании перехода от ооцита к эмбриону. Более того, учитывая, что MATER и PADI6 оба экспрессируются в человеческих ооцитах, лучшее понимание роли мышиных MATER, PADI6 и решеток в ранних этапах развития может дать представление о бесплодии человека.

Материалы и методы

Заявление об этике

Животных разводили и содержали в соответствии с руководящими принципами Корнеллского университета по уходу за животными, а протокол № 2007-0113 о животных был одобрен Комитетом по уходу и использованию животных Корнельского института перед внедрением.

Животные

Создание и проверка линии мышей Mater ^{tm / tm} были описаны ранее [8]. Мышей для размножения CD-1 покупали у коммерческих поставщиков.

Сбор и культивирование ооцитов и эмбрионов

Ооциты собирали у мышей Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} в возрасте от 4 до 6 недель. Ооциты на стадии GV собирали через 46–48 часов после внутрибрюшинной инъекции 5 МЕ гонадотропина сыворотки беременных кобыл (PMSG).Через 46–48 часов после ГПМСГ 5 МЕ хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) вводили внутрибрюшинно, а ооциты с метафазой II (MII) собирали через 12–14 часов. Ооциты собирали в среде M2 (Sigma) и в среду добавляли 5 мкМ милринона (Sigma) или 200 мкМ IBMX (Sigma), когда использовали ооциты GV. Для сбора предимплантационных эмбрионов мышей суперовулировали с помощью PMSG / hCG, как указано выше, спаривались, а двух- и четырехклеточные эмбрионы собирали через 2 и 3 дня соответственно.

Конфокальная микроскопия

Процедуры иммуноокрашивания и экстракции тритоном ооцитов были описаны в другом месте (Yurttas et al., 2008). Ооциты и эмбрионы фиксировали в 4% параформальдидиде (PFA) (EM Sciences) в течение 30 минут. Для экстракции ооциты инкубировали в буфере для экстракции, содержащем 0,1 М KCl, 20 мМ MgCl ₂ , 3 мМ EGTA, 20 мМ HEPES (pH 6,8), 0,1% Triton X-100 и 1 × полный коктейль ингибиторов протеазы (Roche) для 10 минут и быстро промыть в PBS и зафиксировать. Ооциты пермеабилизировали 0,5% Triton X-100 в PBS в течение 30 минут, промывали и инкубировали с кроличьими антителами против MATER (1-1000) (Tong et al., 2004) или с анти-PADI6 морских свинок (1-1000) (Wright и другие., 2003) в буфере IF (1% BSA, 0,5% нормальной козьей сыворотки в PBS) в течение 1 часа с последующей инкубацией в течение 1 часа с соответствующим конъюгированным с Alexa Fluor (1-450) вторичным антителом (Molecular Probes) в буфере IF. Ооциты помещали на предметные стекла с антифадером Slowfade Gold (Molecular Probes) и отображали с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа LSM 510 (Carl Zeiss). Настройки конфокального микроскопа для сравнения экспрессии MATER между Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} ооцитов были идентичны.Для окрашивания нильским красным ооциты быстро промывали 5 раз в среде M2, 3 раза в среде MEM альфа (Invitrogen), а затем инкубировали с нильским красным (Sigma, 5 мкг / 1 мл) в среде MEM альфа в течение 5 минут. Ооциты на короткое время промывали PBS / PVA и PBS, прикрепляли к чашкам MatTek (MatTek Corporation), которые затем заполняли MEM альфа. Все процедуры проводились при комнатной температуре.

Гель-фильтрационная хроматография

Восемьдесят ооцитов GV собирали из яичников самок мышей CD-1.Используя систему AKTApurifier FPLC (GE Healthcare), лизаты ооцитов хроматографировали на суперпозиционной колонке 6 K9 / 30, предварительно уравновешенной несколькими объемами колонки хроматографического буфера, содержащего 154 мМ NaCl, 50 мМ фосфат Na (PH 7,4), 5 мМ EDTA, и 0,02% NaN3. Позиции элюирования стандартов молекулярной массы (Sigma) использовали для калибровки колонки и определения пустотного объема. Фракции (1,0 мл) переносили на PVDF-мембрану с помощью манифольда для слот-блоттинга (Hoefer PR 648) и анализировали с помощью иммуноблоттинга.Эксперименты FPLC повторяли два раза. Иммуноблот был сканирован, и относительная интенсивность полос была измерена с помощью ImageJ.

Вестерн-блоттинг

Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} Ооциты GV (15 для неэкстрагированных и 25 для экстрагированных) собирали, лизировали в 4X буфере Лэммли (8% SDS, 40% глицерин, 20%). % 2-меркаптоэтанола, 0,25 М трис-HCl, pH 6,8, 0,008% бромфенолового синего) и кипятили в течение 10 минут при 100 ° C. Образцы обрабатывали на 10% геле SDS-PAGE при 100–120 В и переносили на мембраны из ПВДФ при 250 мА на 2 часа.Мембраны блокировали 5% молоком в 0,1% TBS-T в течение ночи при 4 ° C, а затем инкубировали с антителами к PADI6 (1–13 000), MATER (1–12 000) и β-актину (1–1 000, Abcam) в течение 1 дня. –2 часа с последующим введением HRP антител против морской свинки (1-15 000) и кролика (1-15 000) (Jackson ImmunoResearch) в течение 1 часа. Блоты проявляли с использованием хемилюминесцентного субстрата Immobilon Western HRP (Millipore). Сканирование пленок и денситометрия проводились с помощью программы Adobe Photoshop CS4.

Просвечивающая электронная микроскопия

Электронная микроскопия была выполнена, как описано в [24], со следующими изменениями.GV-ооциты собирали у мышей соответствующего возраста 4-6 недель Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} (по три мыши в каждой) и немедленно фиксировали 2,5% глютаральдегидом (EM Sciences), 4%. PFA, 0,1% дубильная кислота и 0,01 М MgCl ₂ в буфере 0,1 М какодилат натрия (pH 7,3) при комнатной температуре в течение 2 часов, затем в течение ночи при 4 ° C. Ооциты подвергали последующей фиксации 1% тероксидом осмия в какодилатном буфере в течение 1 часа, окрашивали единым блоком 2% уранилацетатом, дегидратировали в этаноле с постепенным изменением концентрации и затем заключали в смолу LX-112 (Ladd Research).Тонкие срезы (50–70 нм) вырезали алмазным ножом (Diatome) на ультрамикротоме AO / Reichert и собирали на никелевых тонких решетках размером 200 меш. Сетки контрастно окрашиваются 2% уранилацетатом с последующим окрашиванием модифицированным свинцом Сато. Образцы исследовали с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ТЕМ) FEI T12 TWIN при 100 кВ, а изображения собирали с помощью камеры Gatan Orius® с двойным сканированием CCD.

Морфометрический анализ

Для морфометрического анализа изображения ПЭМ (x 11500) были наложены на сетку точек пересечения 2106 (0.С интервалом 8 см) с использованием ImageJ, а точки, занятые CPL, LD, митохондриями и ER, были подсчитаны с использованием метода подсчета точек [29]. Оценка проводилась на 18 произвольно расположенных тонких срезах, по 3 среза от каждого из 6 различных ооцитов, которые были получены из 3 независимых биологических реплик как Mater ^{+ / +} , так и Mater ^{tm / tm} мышей.

Статистический анализ

Средние значения и стандартная ошибка среднего (SEM) были рассчитаны для объемной доли органелл Mater ^{+ / +} и Mater ^{tm / tm} ооцитов, а статистическая значимость была рассчитана с использованием двустороннего t — тест в программе Microsoft Excel 2007.Значение P <0,05 считалось статистически значимым. Все эксперименты повторяли не менее трех раз, если не указано иное.

Благодарности

Благодарим Джона Гразула, Юаньминь Чжана за техническую поддержку.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: BK SC. Проведены опыты: БК РК ЛА. Проанализированы данные: БК. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: LMN. Написал бумагу: БК РК СК.

Список литературы

1. 1.Бачварова Р. (1985) Экспрессия генов в процессе оогенеза и развития ооцитов у млекопитающих. Дев Биол (N Y 1985) 1: 453–524.
2. 2.
   Flach G, Johnson MH, Braude PR, Taylor RA, Bolton VN (1982) Переход от материнского к эмбриональному контролю в двухклеточном эмбрионе мыши. EMBO J 1 (6): 681–686.
3. 3.
   Schultz RM (1993) Регулирование активации зиготических генов у мышей. Биологические исследования 15 (8): 531–538.
4. 4.
   Хаматани Т., Картер М.Г., Шаров А.А., Ко М.С. (2004) Динамика глобальных изменений экспрессии генов во время доимплантационного развития мышей.Dev Cell 6 (1): 117–131.
5. 5.
   Wang QT, Piotrowska K, Ciemerych MA, Milenkovic L, Scott MP, et al. (2004) Полногеномное исследование активности генов выявляет сигнальные пути развития в доимплантационном эмбрионе мыши. Dev Cell 6 (1): 133–144.
6. 6.
   Bowerman B (1998) Материнский контроль формирования паттерна у ранних эмбрионов caenorhabditis elegans. Curr Top Dev Biol 39: 73–117.
7. 7.
   St Johnston D, Nusslein-Volhard C (1992) Происхождение рисунка и полярности в эмбрионе дрозофилы.Ячейка 68 (2): 201–219.
8. 8.
   Тонг З.Б., Голд Л., Пфейфер К.Э., Дорвард Х., Ли Э. и др. (2000) Mater, ген материнского эффекта, необходимый для раннего эмбрионального развития мышей. Нат Генет 26 (3): 267–268.
9. 9.
   Райт П.У., Боллинг Л.С., Калверт М.Э., Сарменто О.Ф., Беркли Е.В. и др. (2003) ePAD, ооцит и ранний эмбриональный белок, подобный пептидиларгининдезиминазе, который локализуется в цитоплазматических листах яйца. Дев Биол 256 (1): 73–88.
10. 10.
    Тонг З. Б., Нельсон Л. М. (1999) Ген мыши, кодирующий антиген ооцита, связанный с аутоиммунной преждевременной недостаточностью яичников.Эндокринология 140 (8): 3720–3726.
11. 11.
    Ли Л., Байбаков Б., Дин Дж. (2008) Подкорковый материнский комплекс, необходимый для преимплантационного эмбриогенеза мышей. Dev Cell 15 (3): 416–425.
12. 12.
    Чжэн П., Дин Дж. (2009) Роль filia, гена материнского эффекта, в поддержании эуплоидии во время эмбриогенеза мышей на стадии дробления. Proc Natl Acad Sci U S A 106 (18): 7473–7478.
13. 13.
    Эспозито Г., Витале А.М., Лейтен Ф.П., Стрик А.М., Коонен-Реемст А.М. и др.(2007) Пептидиларгининдезиминаза (PAD) 6 важна для формирования цитоскелета ооцитов и фертильности женщин. Эндокринол клеток Mol 273 (1-2): 25-31.
14. 14.
    Capco DG, Gallicano GI, McGaughey RW, Downing KH, Larabell CA (1993) Листы цитоскелета яиц и эмбрионов млекопитающих: решетчатая сеть промежуточных нитей. Цитоскелет клеточного мотиля 24 (2): 85–99.
15. 15.
    Wassarman PM, Josefowicz WJ (1978) Развитие ооцитов у мышей: ультраструктурное сравнение ооцитов, выделенных на различных стадиях роста и мейотической компетентности.Дж. Морфол 156 (2): 209–235.
16. 16.
    Gallicano GI, McGaughey RW, Capco DG (1991) Цитоскелет яйца и эмбриона мыши: реорганизация плоских элементов. Цитоскелет клеточного мотила 18 (2): 143–154.
17. 17.
    McGaughey RW, Capco DG (1989) Специализированные элементы цитоскелета в яйцах млекопитающих: структурные и биохимические доказательства их состава. Цитоскелет клеточного мотила 13 (2): 104–111.
18. 18.
    Weakley BS (1969) Начальные этапы формирования цитоплазматических ламелл в ооците хомяка и идентификация связанных электронно-плотных частиц.Z Zellforsch Mikrosk Anat 97 (3): 438–448.
19. 19.
    Бачварова Р., Де Леон В., Шпигельман И. (1981) Рибосомы мышиных яиц: доказательства для хранения в решетках. J Embryol Exp Morphol 62: 153–164.
20. 20.
    Zamboni L (1970) Ультраструктура ооцитов и яйцеклеток млекопитающих. Биол Репрод Дополнение 244–63.
21. 21.
    Гарсия Р. Б., Перейра-Альфонсо С., Сотело Дж. Р. (1979) Аппарат синтеза белка в растущем ооците циклической мыши. Количественное электронно-микроскопическое исследование.Дифференциация 14 (1-2): 101–106.
22. 22.
    Sternlicht AL, Schultz RM (1981) Биохимические исследования оогенеза млекопитающих: кинетика накопления общей и поли (A) -содержащей РНК во время роста ооцитов мыши. J Exp Zool 215 (2): 191–200.
23. 23.
    Burkholder GD, Comings DE, Okada TA (1971) Форма хранения рибосом в ооцитах мышей. Exp Cell Res 69 (2): 361–371.
24. 24.
    Юрттас П., Витале А.М., Фиценри Р.Дж., Коэн-Гулд Л., Ву В. и др.(2008) Роль PADI6 и цитоплазматических решеток в хранении рибосом в ооцитах и ​​контроле трансляции у ранних эмбрионов мыши. Разработка 135 (15): 2627–2636.
25. 25.
    Joshi S, Davies H, Sims LP, Levy SE, Dean J (2007) Экспрессия гена яичников в отсутствие FIGLA, фактора транскрипции, специфичного для ооцитов. BMC Dev Biol 7: 67
26. 26.
    Pan H, O’brien MJ, Wigglesworth K, Eppig JJ, Schultz RM (2005) Профилирование транскриптов во время развития ооцитов мыши и эффект примирования и развития гонадотропинов in vitro.Дев Биол 286 (2): 493–506.
27. 27.
    Тонг З.Б., Голд Л., Де Поль А., Ваневски К., Дорвард Х. и др. (2004) Экспрессия в процессе развития и субклеточная локализация мыши MATER, ооцит-специфического белка, необходимого для раннего развития. Эндокринология 145 (3): 1427–1434.
28. 28.
    Ohsugi M, Zheng P, Baibakov B, Li L, Dean J (2008) Материнский комплекс FILIA-MATER асимметрично локализуется в эмбрионах мышей на стадии дробления. Разработка 135 (2): 259–269.
29. 29.Weibel ER, Kistler GS, Scherle WF (1966) Практические стереологические методы морфометрической цитологии. J Cell Biol 30 (1): 23–38.
30. 30.
    Таширо Ф., Канаи-Адзума М., Миядзаки С., Като М., Танака Т. и др. (2010) Ген материнского эффекта Ces5 / Ooep / Moep19 / Floped необходим для формирования цитоплазматической решетки ооцитов и эмбрионального развития на переходной стадии материнской и зиготической. Гены клеток 15 (8): 813–828.
31. 31.
    Мартин С., Партон Р.Г. (2006) Липидные капли: единый взгляд на динамическую органеллу.Nat Rev Mol Cell Biol 7 (5): 373–378.
32. 32.
    Sturmey RG, O’Toole PJ, Leese HJ (2006) Анализ флуоресцентного резонансного переноса энергии митохондрий: липидная ассоциация в ооците свиньи. Репродукция 132 (6): 829–837.
33. 33.
    Nagano M, Katagiri S, Takahashi Y (2006) Содержание АТФ и способность к созреванию / развитию ооцитов крупного рогатого скота с различной цитоплазматической морфологией. Зигота 14 (4): 299–304.
34. 34.
    Амбруози Б., Лакаландра Г.М., Йорга А.И., Де Сантис Т., Мунье С. и др.(2009) Цитоплазматические липидные капли и распределение митохондрий в ооцитах лошади: влияние на созревание, оплодотворение и развитие ооцитов после ИКСИ. Териогенология 71 (7): 1093–1104.
35. 35.
    Niimura S, Kawakami S, Takano H (2004) Изменения количества цитоплазматических включений в ооцитах мышей во время мейотического созревания in vivo и in vitro. Репродуктивная медицина и биология 3 (4): 231–236.
36. 36.
    Маральди Т., Риччио М., Сена П., Марцона Л., Николи А. и др.(2009) Белок MATER как субстрат PKCepsilon в кумулюсных клетках человека. Мол Hum Reprod 15 (8): 499–506.
37. 37.
    Горин М.А., Пан Q (2009) Протеинкиназа C-эпсилон: онкоген и биомаркер появляющейся опухоли. Молекулярный рак 8: 9.

.